- ￥600 - 3200
- 上海莼试
- CS-01Y71974
- 国产
- 2025年07月14日
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- 详细信息
- 技术资料
- 库存：
54
- 英文名：
Dermaseptin TFA
- 供应商：
上海莼试
- 保存条件：
-20°C, protect from light
- 规格：
1mg 5mg 10mg
本产品仅供科学实验研究使用! 不能用于临床或动物诊断！
产品描述:
Dermaseptin TFA, a peptide isolated from frog skin, exhibits potent antimicrobial activity against bacteria, fungi, and protozoa at micromolar concentration[1].Dermaseptin TFA is a water-soluble, thermostable, and nonhemolytic peptide endowed with highly potent antimicrobial activity against pathogenic fungi at micromolar concentration. Circular dichroism spectra of Dermaseptin TFA in hydrophobic media indicated 80% alpha-helical conformation, and predictions of secondary structure suggested that Dermaseptin TFA can be configured as an amphiphatic alpha-helix spanning over residues 1-27, a structure that perturbs membrane functions regulating water flux[1]. Dermaseptin TFA exerts a lytic action upon bacteria, protozoa, yeasts, and filamentous fungi at micromolar concentrations. Molecular elements responsible for the exceptional antimicrobial potency of Dermaseptin TFA are to be traced to the NH2-terminal alpha-helical amphipathic segment spanning residues 1-18 of the molecule[1].Dermaseptin TFA (5-100 μg/ml; 48 hours) inhibits by 100% the proliferation of most microorganisms tested, including Gram-positive or Gram-negative bacteria, parasites, yeasts, and filamentous fungi, at micromolar concentrations[2]. Dermaseptin TFA (5-100 μg/ml; 48 hours) does not inhibit the proliferation of human KJ3 cells after a 48 h incubation, and Dermaseptin TFA treatment for 1 h does not permeate guinea pig lymphocytes up to the highest concentration assayed (200 μg/ml). Hemolysis of rabbit erythrocytes occurrs after 1 h of treatment at doses above 200 μg/ml, with 50% hemolysis at 350 μg/ml[2]. Dermaseptin TFA has antimicrobial activities and is against Aeromonas cauiae, Pseudomonas aeroginusa, Escherichia coli, Enterococcus faecalis, L. mezicana (NFα strain) and Microsporum canis (IP1194) with MIC values of 50 μg/ml; 100 μg/ml; 25 μg/ml; 15 μg/ml; and 50 μg/ml, respectively[2].[1]. Mor A, et al. Isolation, amino acid sequence, and synthesis of Dermaseptin TFA, a novel antimicrobial peptide of amphibian skin. Biochemistry. 1991 Sep 10;30(36):8824-30. [2]. Mor A, et al. The NH2-terminal alpha-helical domain 1-18 of Dermaseptin TFA is responsible for antimicrobial activity. J Biol Chem. 1994 Jan 21;269(3):1934-9.
化学性质:
规格：1mg 5mg 10mg
CAS：N/A
别名：N/A
化学名：N/A
分子式：C154H258N43F3O46S2
分子量：3569.12
溶解度：N/A
储存条件：-20°C, protect from light
General tips：For obtaining a higher solubility , please warm the tube at 37 ℃ and shake it in the ultrasonic bath for a while.
Shipping Condition: Evaluation sample solution : ship with blue ice All other available size: ship with RT , or blue ice upon request
使用方法:
1. 常用筛选浓度
注意：用来筛选稳转株的工作浓度需要根据细胞类型，培养基，生长条件和细胞代谢率而变化，推荐使用浓度为50-1000μg/mL。对于第一次使用的实验体系建议通过建立杀灭曲线(kill curve)，即剂量反应性曲线，来确定最佳筛选浓度。
一般而言，哺乳动物细胞50-500μg/mL;细菌/植物细胞20-200μg/mL;真菌300-1000μg/mL。
2. 杀灭曲线的建立
注意：为了筛选得到稳定表达目的蛋白的细胞株，需要确定能够杀死未转染宿主细胞的抗生素浓度，可通过建立杀灭曲线(剂量反应曲线)来实现，至少选择5个浓度。
1) 第一天：未转化的细胞按照20-25%的细胞密度铺在合适的培养板上，37℃，CO2培养过夜;注：对于需要更高密度来检测活力的细胞，可增加接种量。
2) 根据细胞类型，设定合适范围内的浓度梯度。以哺乳动物细胞为例，可设定50，100，250，500，750，1000μg/mL。先用去离子水或者PBS buffer按照1:10的比例将母液稀释到5 mg/ml，然后按照下表稀释到相应浓度的工作液。
3) 第二天：替换旧的培养基，换用新鲜配制的含有相应浓度药物的培养基。每个浓度做三个平行孔。
4) 接下来每3-4天更换新的含药物培养基。
5) 按照固定的周期(如每2天)进行活细胞计数来确定阻止未转染细胞生长的恰当浓度。选择在理想的天数(通常是7-10天)内能够杀死绝大多数细胞的浓度为稳定转染细胞筛选用的工作浓度。
3. 稳定转染细胞的筛选
1) 转染48h后，用含有适当浓度的潮霉素B筛选培养基来传代细胞(直接传代或者稀释后传代)。
注意：细胞处于活跃分裂状态时抗生素的杀伤。则当细胞过于稠密，其效率会降低。为了得到较好的筛选效果，最好将细胞稀释至丰度不超过25%
2) 每隔3-4天更换含有药物的筛选培养液。
3) 筛选7天后观察并评估细胞克隆(集落)的形成情况。集落的形成可能还需要一周或者更多的时间，这取决于宿主细胞类型，转染，以及筛选效果。
4) 挑取并转移5-10个抗性克隆于35mm细胞培养板，继续用含药物的筛选培养液维持培养7天。
5) 之后更换正常培养基培养即可。
蛋白酶抑制剂混合物实验步骤:
(1)Dermaseptin TFA实验开始前将RNA提取液于65℃水浴锅中预热,离心管中加入ME(巯基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取约0.8g菌丝体(液体培养获得的菌丝用真空抽滤即可！固体培养就更好说了),在液氮中迅速磨成精细粉末,装入50mL离心管,按1g材料8mL的量加入预热的RNA提取液,颠倒混匀
(3)65℃水浴3-10 min,期间混匀2-3次
(4)加入等体积的酚(注意是酸酚pH4.5)::yi戊醇(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等体积的yi戊醇(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V体积10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或过夜)
(7)10,000rpm,4℃离心20min
(8)弃上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚::yi戊醇(25:24:1)抽提两次,:yi戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V体积的无水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃离心20 min
(12)弃上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC处理水溶解
(14)用非变性琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计扫描检测RNA的质量(在抽提过程中,若蛋白质含量或其它的杂质还较多,可以增加抽提次数)
公司正在出售的产品:
| 产品名称 | Dermaseptin TFA | 产品货号 | CS-01Y71974 |
| 规格 | 1mg 5mg 10mg | CAS号 | N/A |
| 含量 | >98.00% | 分子式 | C154H258N43F3O46S2 |
| 分子量 | 3569.12 | 用途 | 仅供科研研究使用 |
Dermaseptin TFA, a peptide isolated from frog skin, exhibits potent antimicrobial activity against bacteria, fungi, and protozoa at micromolar concentration[1].Dermaseptin TFA is a water-soluble, thermostable, and nonhemolytic peptide endowed with highly potent antimicrobial activity against pathogenic fungi at micromolar concentration. Circular dichroism spectra of Dermaseptin TFA in hydrophobic media indicated 80% alpha-helical conformation, and predictions of secondary structure suggested that Dermaseptin TFA can be configured as an amphiphatic alpha-helix spanning over residues 1-27, a structure that perturbs membrane functions regulating water flux[1]. Dermaseptin TFA exerts a lytic action upon bacteria, protozoa, yeasts, and filamentous fungi at micromolar concentrations. Molecular elements responsible for the exceptional antimicrobial potency of Dermaseptin TFA are to be traced to the NH2-terminal alpha-helical amphipathic segment spanning residues 1-18 of the molecule[1].Dermaseptin TFA (5-100 μg/ml; 48 hours) inhibits by 100% the proliferation of most microorganisms tested, including Gram-positive or Gram-negative bacteria, parasites, yeasts, and filamentous fungi, at micromolar concentrations[2]. Dermaseptin TFA (5-100 μg/ml; 48 hours) does not inhibit the proliferation of human KJ3 cells after a 48 h incubation, and Dermaseptin TFA treatment for 1 h does not permeate guinea pig lymphocytes up to the highest concentration assayed (200 μg/ml). Hemolysis of rabbit erythrocytes occurrs after 1 h of treatment at doses above 200 μg/ml, with 50% hemolysis at 350 μg/ml[2]. Dermaseptin TFA has antimicrobial activities and is against Aeromonas cauiae, Pseudomonas aeroginusa, Escherichia coli, Enterococcus faecalis, L. mezicana (NFα strain) and Microsporum canis (IP1194) with MIC values of 50 μg/ml; 100 μg/ml; 25 μg/ml; 15 μg/ml; and 50 μg/ml, respectively[2].[1]. Mor A, et al. Isolation, amino acid sequence, and synthesis of Dermaseptin TFA, a novel antimicrobial peptide of amphibian skin. Biochemistry. 1991 Sep 10;30(36):8824-30. [2]. Mor A, et al. The NH2-terminal alpha-helical domain 1-18 of Dermaseptin TFA is responsible for antimicrobial activity. J Biol Chem. 1994 Jan 21;269(3):1934-9.
化学性质:
规格：1mg 5mg 10mg
CAS：N/A
别名：N/A
化学名：N/A
分子式：C154H258N43F3O46S2
分子量：3569.12
溶解度：N/A
储存条件：-20°C, protect from light
General tips：For obtaining a higher solubility , please warm the tube at 37 ℃ and shake it in the ultrasonic bath for a while.
Shipping Condition: Evaluation sample solution : ship with blue ice All other available size: ship with RT , or blue ice upon request
使用方法:
1. 常用筛选浓度
注意：用来筛选稳转株的工作浓度需要根据细胞类型，培养基，生长条件和细胞代谢率而变化，推荐使用浓度为50-1000μg/mL。对于第一次使用的实验体系建议通过建立杀灭曲线(kill curve)，即剂量反应性曲线，来确定最佳筛选浓度。
一般而言，哺乳动物细胞50-500μg/mL;细菌/植物细胞20-200μg/mL;真菌300-1000μg/mL。
2. 杀灭曲线的建立
注意：为了筛选得到稳定表达目的蛋白的细胞株，需要确定能够杀死未转染宿主细胞的抗生素浓度，可通过建立杀灭曲线(剂量反应曲线)来实现，至少选择5个浓度。
1) 第一天：未转化的细胞按照20-25%的细胞密度铺在合适的培养板上，37℃，CO2培养过夜;注：对于需要更高密度来检测活力的细胞，可增加接种量。
2) 根据细胞类型，设定合适范围内的浓度梯度。以哺乳动物细胞为例，可设定50，100，250，500，750，1000μg/mL。先用去离子水或者PBS buffer按照1:10的比例将母液稀释到5 mg/ml，然后按照下表稀释到相应浓度的工作液。
3) 第二天：替换旧的培养基，换用新鲜配制的含有相应浓度药物的培养基。每个浓度做三个平行孔。
4) 接下来每3-4天更换新的含药物培养基。
5) 按照固定的周期(如每2天)进行活细胞计数来确定阻止未转染细胞生长的恰当浓度。选择在理想的天数(通常是7-10天)内能够杀死绝大多数细胞的浓度为稳定转染细胞筛选用的工作浓度。
3. 稳定转染细胞的筛选
1) 转染48h后，用含有适当浓度的潮霉素B筛选培养基来传代细胞(直接传代或者稀释后传代)。
注意：细胞处于活跃分裂状态时抗生素的杀伤。则当细胞过于稠密，其效率会降低。为了得到较好的筛选效果，最好将细胞稀释至丰度不超过25%
2) 每隔3-4天更换含有药物的筛选培养液。
3) 筛选7天后观察并评估细胞克隆(集落)的形成情况。集落的形成可能还需要一周或者更多的时间，这取决于宿主细胞类型，转染，以及筛选效果。
4) 挑取并转移5-10个抗性克隆于35mm细胞培养板，继续用含药物的筛选培养液维持培养7天。
5) 之后更换正常培养基培养即可。
蛋白酶抑制剂混合物实验步骤:
(1)Dermaseptin TFA实验开始前将RNA提取液于65℃水浴锅中预热,离心管中加入ME(巯基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取约0.8g菌丝体(液体培养获得的菌丝用真空抽滤即可！固体培养就更好说了),在液氮中迅速磨成精细粉末,装入50mL离心管,按1g材料8mL的量加入预热的RNA提取液,颠倒混匀
(3)65℃水浴3-10 min,期间混匀2-3次
(4)加入等体积的酚(注意是酸酚pH4.5)::yi戊醇(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等体积的yi戊醇(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V体积10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或过夜)
(7)10,000rpm,4℃离心20min
(8)弃上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚::yi戊醇(25:24:1)抽提两次,:yi戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V体积的无水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃离心20 min
(12)弃上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC处理水溶解
(14)用非变性琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计扫描检测RNA的质量(在抽提过程中,若蛋白质含量或其它的杂质还较多,可以增加抽提次数)
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| Hydroxy-α-sanshool | 微黄细颈线虫PCR检测试剂盒 |
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