无血清细胞冻存液（﹣80℃直冻）

产品介绍：

多沃生产的无血清细胞冻存液（Cell Culture Freezing Medium）是一种即用型的细胞低温冻存液，适用于绝大部分的哺乳动物细胞冻存。

本产品是即用型的无菌溶液，细胞收集后，加入适量冻存液混匀即可，无需自行配置任何溶液，使用方便快捷。该细胞冻存液为无血清冻存液，不含任何蛋白类物质。本产品打破了传统的“慢冻速溶”的细胞冻存方法，做到了“快冻快融”的同时也保证了复苏时细胞的存活率。

如果每管细胞加入1ml细胞冻存液，一个包装的的本产品可以用于约100管细胞的冻存。

保存说明：

4℃保存，一年有效。

使用说明：

细胞收集

a. 对于贴壁细胞：

除去培养液后用无菌PBS轻轻洗涤细胞一次去除残留血清，加入适量胰酶消化液（DW0007/DW008/DW009）消化细胞，常显微镜观察细胞变圆或肉眼观察细胞间出现缝隙时即为消化好。迅速加入同等体积的血清，终止消化，用移液器轻轻吹打细胞，吹打细胞过程要适当轻柔，否则会影响复苏时细胞存活率。

b. 对于悬浮细胞：直接从b步骤开始进行细胞收集。

将细胞悬液移至离心管中，如15ml离心管。

细胞计数，计算出细胞总数和所需细胞冻存液的量。细胞的冻存密度一般为1×10⁶~1×10⁷ cells/ml。

1500rpm（此为参考转速），离心5-10min，弃上清。离心具体速度和时间取决于细胞类型。

冻存处理：

a. 加入适量细胞冻存液，吹打以重悬细胞，根据细胞类型调整细胞密度(一般为1×10⁶ cells/ml或更高)。

b. 分装于细胞冻存管中，并做好标识。

c. 将细胞冻存管直接放入-80℃冰箱保存。

细胞复苏：

a.  从-80℃冰箱中取出冻存管，迅速置于37ºC水浴锅内，轻轻晃动(1分钟内)，直至只剩小部分冰块残留。

b. 将细胞悬液转移至15ml无菌离心管中，加入约5-10ml预热的完全培养基，轻轻混匀；对于一些复苏效率很高的细胞也可直接将细胞悬液转移至离心管进行下一步骤的离心。

c. 1500rpm（此为参考转速），离心5-10min，离心速度和时间取决于细胞类型。

d. 确保细胞沉积于管底后，小心弃掉上清。

e. 加入适量预热的完全培养基，轻轻吹匀后转移至培养器皿中，放入细胞培养箱中培养。

注意事项：

1. 请确保冻存前细胞生长情况良好，例如处于对数生长期的细胞，并且冻存时存活率大于90%。

2. 须使用专门用于液氮冻存的细胞冻存管，不能使用普通的离心管。否则在后续解冻时，易发生离心管爆裂，而容易造成人身伤害。

3. 建议细胞后期冻存在液氮中，可以长时间进行保存。如果置于-80ºC保存，保存时间大约为1年。

4. 请使用耐受有机溶剂的marker笔(Alcohol Resistant Marker)进行标记，以防做的标记被酒精或异丙醇等有机溶剂擦掉，而不能辨识。

5. 本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

6. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。