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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
现货
- 保质期:
一年
- 供应商:
上海经科化学科技有限公司
- 保存条件:
-80 ℃
- 规格:
10×100μl/50×100μl
| 规格: | 10×100μl | 产品价格: | ¥388.0 |
|---|---|---|---|
| 规格: | 50×100μl | 产品价格: | ¥1588.0 |
产品简介:
碧云天生产的ER2566超级感受态细胞,英文名ER2566 Super Competent Cells,是一种可以用于重组蛋白表达的E. coli ER2566即用型化学感受态细胞。使用pUC19质粒进行热激活转化,转化效率可以高达1×109cfu/μg DNA以上。
ER2566是BL21的部分基因组序列替换为K-12的同源序列后所得菌株。引入K-12的6%基因组序列后,ER2566的表型不同于BL21,表现为耐受非特异性核酸酶所引起的DNA损伤等[1]。因此,ER2566常用于表达限制性内切酶、核酸酶以及DNA聚合酶等重组蛋白。
ER2566细胞的T7 RNA聚合酶位于Lac启动子下游,适用于IPTG诱导表达系统(如pET系列) [2]。
ER2566菌株的基因型为F- λ- fhuA2 [lon] ompT lacZ::T7 gene1 gal sulA11 Δ(mcrC-mrr)114::IS10 R(mcr-73::miniTn10-TetS)2 R(zgb-210::Tn10)(TetS) endA1 [dcm]。其中fhuA2赋予ER2566菌株对噬菌体T1的抗性;Δ(mcrC-mrr)114及mcr-73突变的存在使ER2566菌株无法对外源DNA进行标记、限制,提高了外源甲基化DNA的转化效率;lon和ompT蛋白酶的缺失有效防止异源蛋白在大肠杆菌体内的降解。
保存条件:
-80℃保存,一年内有效。避免反复冻融,通常制备6个月后转化效率随保存时间延长而逐渐降低。
注意事项:
感受态细胞禁止反复冻融,并应尽可能避免冻融,反复冻融会导致转化效率大幅下降。
感受态细胞融化后,须尽快加入待转化样品,不宜在无转化产物的情况下放置时间超过10分钟或以上时间,以免降低感受态细胞的转化效率。
待转化样品的体积通常不宜超过感受态细胞体积的10%,样品体积过大会导致转化效率下降。
感受态细胞对于温度变化非常敏感,需要避免出现不应有的使用说明之外的温度变化。
感受态细胞对于机械力非常敏感。加入待转化样品时应轻柔操作,不能使用移液枪吹打混匀。
通常仅建议取部分样品用于转化,这样万一遇到转化失败的情况,还留有样品可以再次进行转化。
本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
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文献和实验The Inoue Method for Preparation and Transformation of Competent E. coli: "Ultra Competent" Cells Joseph Sambrook Peter Maccallum Cancer Institute and The University of Melbourne
一、材料与试剂 1. SOBor2xYT2. MES3. 足够80个管子的TFB(50 mL)/400转化DMSO4. 5 M NaCl 二、仪器 1. 离心机 三、步骤 1. 室温下在5 ml SOB或2×YT中接种菌并且培养过夜。2. 加过夜培养的菌到500 ml 的SOB或2×YT,其装在4L瓶中以最大限度的透气。加入36 ml 5 M 的NaCl,在30℃下培养。3. 大约3 h,OD600达到0.5。4. 离心细胞。取沉淀,吸取
的宿主菌基因型,并使细胞生长加快(当天获得菌落),已经成功应用于25kb超螺旋DNA和8kb连接DNA的克隆。XL10-Gold®,BL21-Gold,BL21-CodonPlus®,SoloPack® Gold 和96Pack® Gold等系列细胞都带有这个新的性状。超级感受态细胞 Stratagene提供多种>5 x 109 转化子/μg 超螺旋DNA转化效率的化学法超级感受态细胞正是克隆获得大质粒、连接DNA克隆和建库时最值得推荐的。电转化感受态细胞 Stratagene
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