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上海经科化学科技有限公司
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5µg
pLenti-C19orf48-sgRNA (C19orf48基因敲除质粒)是一种在动物细胞中可以同时表达Cas9、目的基因的sgRNA和puromycin抗性基因的质粒。用于在动物细胞中直接基于CRISPR/Cas9技术敲除目的基因,或者通过包装慢病毒后基于CRISPR/Cas9技术敲除目的基因。本质粒中sgRNA的有效性已经通过T7EI法的验证。
本质粒在细菌中为Amp抗性,全长约13,000bp。本质粒的关键图谱信息请参考图1。本质粒可直接转染细胞用于目的基因的CRISPR/Cas9敲除,以及通过puromycin筛选稳定细胞株;也可以与pMDLg、Rev及VSV-g共转HEK293T细胞进行重组慢病毒(lentivirus)的包装,然后再用于感染细胞或组织并进行目的基因的CRISPR/Cas9敲除。

图1. 表达sgRNA、Cas9和puromycin抗性的pLenti-sgRNA质粒关键图谱信息。
本质粒中的sgRNA基于碧云天研发的CRISPR/Cas9 sgRNA快速筛选和验证体系获得,sgRNA的有效性已经通过T7EI法验证。
本质粒用于实验时,建议同时选购无任何靶向的对照质粒pLenti-Control-sgRNA (L00011)或靶向GFP的对照质粒pLenti-GFP-sgRNA (L00013)。
碧云天同时提供基于CRISPR/Cas9技术的C19orf48基因敲除的质粒(L12575 pLenti-C19orf48-sgRNA)、慢病毒(L12576 C19orf48 Knockout Lentivirus)、HEK293T细胞(L12577 C19orf48 Knockout HEK293T Cells)、HEK293T敲除细胞的RIPA裂解液(L12578 C19orf48 Knockout HEK293T RIPA Lysate)、HEK293T敲除细胞的Trizol裂解液(L12579 C19orf48 Knockout HEK293T Trizol Lysate)等产品,具体请在碧云天网站查询或在本产品网页点击相应产品。
C19orf48基因的基本信息如下:
| Species | Gene Symbol | Gene ID | GenBank Accession | Transcript |
| Human | C19orf48 | 84798 | BC006151 | NM_032712 |
| About the gene | |
| Official Symbol | C19orf48 |
| Previous Symbol | - |
| Official Full Name | chromosome 19 open reading frame 48 |
| Synonyms | MGC13170; BC006151 |
| Location | 19q13.33 |
| Gene Type | protein-coding gene |
| Uniprot ID | Q6RUI8 |
| Pathway/Library | Lung Cancer Growth Related Genes Library |
| Gene Summary | C19orf48 as the gene encoding a novel minor H antigen presented by HLA-A*0201 and recognized by CTL clones isolated from two patients with metastatic RCC who were treated with nonmyeloablative HLA-identical allogeneic HCT. The C19orf48 gene, first identified by the Mammalian Gene Collection Program, was subsequently cloned from a cisplatin-resistant human lung adenocarcinoma cell line. Sequence analysis of C19orf48 transcripts predicted a 117-residue translation product encoded by the largest ORF that is located in both the NM_199250 and NM_199249 transcripts. The studies of T cell recognition of C19orf48 provide direct evidence for a translation product derived from a novel ORF in the +2 frame of NM_199250 that encodes a predicted polypeptide of only 48 residues. Although differential splicing of 5 exons result in the alternative C19orf48-derived transcripts NM_199249 or NM_199250 that are discordant for the ORF encoding the antigenic 48-residue protein, our analyses of transcript expression by both northern blot and Q-PCR demonstrate that the NM_199250 transcript encoding the antigenic 48 residue polypeptide is the dominant transcript, with expression levels that are 100- to 600-fold greater than the expression levels of NM_199249. Discovery of the C19orf48-encoded minor H antigen within an unrecognized ORF adds to a growing body of data demonstrating that minor H peptides can be derived from surprisingly short protein species encoded by unconventional or occult ORFs. The C19orf48 genomic locus lies between the androgen-regulated testicular acid phosphatase (ACPT) gene and the androgen-regulated kallikrein gene cluster on chromosome 19q. |
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文献和实验CRISPR/Cas9 基因敲除实验-- sgRNA 及引物设计
前期记录先确定目标基因CRISPR/Cas9 基因敲除实验 -- 确定目标基因然后对目的基因进行背景调查CRISPR/Cas9 基因敲除实验-- 目标基因背景调查设计 sgRNA 及引物CRISPR-Cas9 基因敲除 sgRNA 设计CRISPR-Cas9 基因敲除 sgRNA 设计好之后对前期文章的补充:设计 sgRNA 之后,需要对结果进行判断:但为什么 0.7044 分数的哪一个没有选,我也不知道为什么,总感觉他们的顺序不是随意的排的。或许有人能解答一下为什么。顺手把设计工具的解说放上
最近 CRISPR/Cas9 基因敲除技术可谓风靡全世界的实验室,CRISPR 被称为规律成簇间隔短回文重复,其实际上就是一种基因编辑器,是细菌用以保护自身对抗病毒的一个系统。后来,研究人员发现,它似乎是一种精确的万能基因武器,可以用来删除、添加、激活或抑制其他生物体的目标基因。由于其相对于前几代基因敲除技术而言更为简便高效。所以一经问世便受到科研界的热捧。利用 Cas9 质粒建立 knock-out 细胞系实验过程主要有以下几步:1. 确定待敲除基因的靶位点;2. 设计识别靶位点识别的一对
和RecBCD蛋白组成,在基因敲除时必须以环状质粒存在)、结合转化敲除系统及温度敏感型质粒敲除系统等可供选择。 2 FLP-FRT系统和Cre-loxP系统 这两个系统都是位点特异性重组酶系统,其中FLP-FRT源于酿酒酵母,Cre-loxP源于F1噬菌体。两个系统的基本原理类似。以Cre-loxP系统为例,该系统含有两种成分:第一个部分是一段长34 bp的重组酶识别的DNA序列(loxP),其中含有两个13 bp的反向重复序列和一个8 bp的核心序列;第二个是Cre
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