pcDNA3.1-SARS-CoV-2-N-Myc

产品简介：
pcDNA3.1-SARS-CoV-2-N-Myc是碧云天自行研发的哺乳动物细胞表达质粒，用于表达C端带有Myc标签(EQKLISEEDL)的新冠病毒(SARS-CoV-2) 核衣壳(Nucleocapsid, N)蛋白，可以使用抗Myc标签的抗体来识别N蛋白的表达，或进行免疫共沉淀分析等。该质粒含有CMV启动子，可以高效启动目的蛋白在细胞中的表达，质粒为氨苄青霉素抗性。

N蛋白是冠状病毒的四个结构蛋白之一，由N基因编码，为核衣壳磷酸蛋白(nucleocapsid phosphoprotein)，是冠状病毒的主要结构蛋白，也是冠状病毒编码蛋白中表达丰度最高的蛋白。N蛋白在病毒的组装、释放以及病毒的致病性方面发挥重要作用。冠状病毒N蛋白功能相对保守，包含两个结构独立的RNA结合结构域：N端RNA结合结构域(N-terminal RNA binding domain，NTD)和C端结构域(C-terminal domain，CTD)，中间还有一个丝氨酸和精氨酸富集的连接区(serine and arginine linker region, SR linker)。冠状病毒的N蛋白能与病毒RNA紧密结合，通过螺旋堆积将RNA包装，从而保护病毒的基因组RNA。在病毒感染过程中，N蛋白是所有结构蛋白中诱导免疫反应最强烈的蛋白，由于其分子量小，没有糖基化修饰，易于蛋白表达纯化，因此常作为冠状病毒血清学检查最为合适的抗原。

pcDNA3.1-SARS-CoV-2-N-Myc质粒的主要信息如下：

Feature Nucleotide	Position
CMV promoter	232-819
T7 promoter and T7 primer binding site	863-882
Multiple cloning site	895-922
N protein	923-2179
Myc-tag	2180-2209
BGH pA	2250-2474
f1 origin of ss-DNA replication	2520-2948
SV40 promoter	2953-3296
Neomycin resistance ORF	3358-4152
SV40 polyA signal	4326-4456
pUC origin	4839-5509
Ampicillin resistance ORF	5654-6650
bla promoter	6549-6555

pcDNA3.1-SARS-CoV-2-N-Myc质粒(6650bp)的图谱如下：

pcDNA3.1-SARS-CoV-2-N-Myc的多克隆位点的详细图谱见说明书

pcDNA3.1-SARS-CoV-2-N-Myc中没有的酶切位点(Restriction enzymes that do not cut pcDNA3.1-SARS-CoV-2-N-Myc)包括：

AgeI	AleI	AscI	AsiSI	BaeI	BamHI	BlpI
BsgI	BsiWI	BsmBI	BspDI	BspEI	BsrGI	BstEII
Bsu36I	ClaI	EcoNI	EcoRV	Esp3I	FseI	HpaI
NotI	PacI	PmlI	PpuMI	PshAI	SacII	SbfI
SfiI	SgrAI	SrfI	SwaI

pcDNA3.1-SARS-CoV-2-N中的单酶切位点(Restriction enzymes that cut pcDNA3.1-SARS-CoV-2-N-Myc)包括：

Acc65I	G`GTAC,C	917	NarI	GG`CG,CC	3486
AfeI	AGC|GCT	1852	NheI	G`CTAG,C	895
AflII	C`TTAA,G	908	NruI	TCG|CGA	208
AhdI	GACNN,N`NNGTC	5727	PaeR7I	C`TCGA,G	1122
ApaI	G,GGCC`C	2223	PciI	A`CATG,T	4837
BbvCI	CC`TCA,GC	1677	PflMI	CCAN,NNN`NTGG	1277
BcgI	,NN`(N)10CGA(N)6TGC(N)10,NN`	6232	PluTI	G,GCGC`C	3489
BmgBI	CAC|GTC	1751	PspOMI	G`GGCC,C	2219
BmtI	G,CTAG`C	899	PspXI	VC`TCGA,GB	1122
BsaBI	GATNN|NNATC	3345	PvuI	CG,AT`CG	6097
BseRI	GAGGAG(N)8,NN`	3272	RsrII	CG`GWC,CG	4002
BsmI	GAATG,CN`	4406	SacI	G,AGCT`C	818
BssHII	G`CGCG,C	3883	ScaI	AGT|ACT	6207
BstBI	TT`CG,AA	4168	SexAI	A`CCWGG,T	3043
BstXI	CCAN,NNNN`NTGG	1936	SfoI	GGC|GCC	3487
BstZ17I	GTA|TAC	4458	SmaI	CCC|GGG	3299
CspCI	,NN` (N)11CAA(N)5GTGG(N)10,NN`	626	SnaBI	TAC|GTA	590
DraIII	CAC,NNN`GTG	2753	SpeI	A`CTAG,T	249
EagI	C`GGCC,G	3392	SspI	AAT|ATT	6531
Eco53kI	GAG|CTC	816	StuI	AGG|CCT	3275
EcoO109I	RG`GNC,CY	2219	TspMI	C`CCGG,G	3297
EcoRI	G`AATT,C	1200	XbaI	T`CTAG,A	2213
KasI	G`GCGC,C	3485	XcmI	CCANNNN,N`NNNNTGG	1775
KpnI	G,GTAC`C	921	XhoI	C`TCGA,G	1122
MluI	A`CGCG,T	228	XmaI	C`CCGG,G	3297
MscI	TGG|CCA	3568

pcDNA3.1-SARS-CoV-2-N-Myc质粒中推荐使用的测序引物序列如下：

pcDNA3.1 primer (829-848): 5'- CTAGAGAACCCACTGCTTAC -3'

BGH pA primer (2244-2261): 5'- TAGAAGGCACAGTCGAGG -3'

pcDNA3.1-SARS-CoV-2-N-Myc的全序列信息: D2943 pcDNA3.1-SARS-CoV-2-N-Myc序列.txt。

pcDNA3.1-SARS-CoV-2-N-Myc质粒转染HEK293T细胞后的表达效果请参考图1:

图1：Western blot实验检测SARS-CoV-2 N基因在HEK293T细胞的表达。1.转染pcDNA3.1空载质粒；2.转染pcDNA3.1-SARS-CoV-2-N-Myc质粒。使用碧云天Lipo8000™转染试剂(C0533)将2µg pcDNA3.1或pcDNA3.1-SARS-CoV-2-N-Myc质粒转染六孔板中密度为80%左右的HEK293T细胞，37℃恒温培养48h后，弃掉孔内培养液，PBS洗涤三遍后加入150µl Western及IP细胞裂解液(P0013)充分裂解，4℃离心，取上清用BCA法测蛋白浓度，然后经浓度4-20%的预制胶(P0524)电泳，每孔蛋白总量20µg，转膜、封闭后使用1:1000稀释的Myc抗体(AM926)室温孵育1h，洗涤后1:1000稀释的二抗(A0192)室温孵育1h，最后经BeyoELC Star(P0018AS)化学发光，并使用BeyoImager™ 600化学发光成像系统(EI600)拍照记录。

保存条件：

-20℃保存。

注意事项：

本质粒未经碧云天书面许可不得用于任何商业用途，也不得移交给订货人所在实验室外的任何个人或单位。

本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。