pCMV-N-Flag-Hyg

产品简介：
pCMV-N-Flag-Hyg是碧云天自行研发的用于在哺乳动物细胞中表达N端带有Flag标签(Flag Tag，DYKDDDDK)的目的蛋白的表达质粒。质粒含有CMV启动子可以高效启动目的蛋白在细胞中的表达；在多克隆位点的5′端含有一个编码Flag标签的序列，可以表达含有Flag标签的融合蛋白，因此可以方便地使用抗Flag的抗体来识别目的蛋白，从而有利于目的蛋白检测和分离纯化。

pCMV-N-Flag-Hyg质粒为氨苄青霉素抗性和潮霉素B (Hygromycin B)抗性。可利用其氨苄青霉素抗性转化大肠杆菌后筛选阳性菌，而在转染哺乳动物细胞后，可利用其Hygromycin B抗性筛选稳定表达目的蛋白的细胞株。Hygromycin B (ST1389)可以从碧云天购买。

Hygromycin B是来源于吸水链霉菌(Streptomyces hygroscopicus)的一种氨基糖苷类抗生素，可通过中断易位并增加80S核糖体上的错误翻译而抑制蛋白质的合成，从而杀死原核或真核细胞。大肠杆菌来源的Hygromycin B抗性基因(hyg或hph)所编码的Hygromycin B磷酸转移酶可将Hygromycin B磷酸化，导致其失活，从而使细胞对Hygromycin B产生抗性。因此，Hygromycin B可用于筛选成功转染Hygromycin B抗性基因的原核或真核细胞。

Hygromycin B用于细胞筛选的浓度范围是100~1000μg/ml，实际应用时应针对不同的细胞系测试Hygromycin B的浓度梯度，确定最佳使用浓度。

pCMV-N-Flag-Hyg质粒(5586bp)的图谱如下：

pCMV-N-Flag-Hyg质粒的主要信息如下：

Feature Nucleotide	Position
Ampicillin resistance ORF	63-923
CMV promoter	1405-1608
T3 promoter and T3 primer binding site	1654-1672
Flag tag	1713-1736
Multiple cloning site (XmaI-ApaI)	1739-1811
T7 promoter and T7 primer binding site	1857-1875
SV40 polyA signal	2149-2270
f1 origin of ss-DNA replication	2277-2732
SV40 promoter	2865-3222
Hygromycin resistance ORF	3257-4282
HSV-thymidine kinase (TK) polyA signal	4514-4561
pUC origin	4890-5478

pCMV-N-Flag-Hyg的多克隆位点的详细图谱见说明书

pCMV-N-Flag-Hyg中没有的酶切位点(Restriction enzymes that do not cut pCMV-N-Flag-Hyg)包括：

Afe I	Afl II	Age I	Asc I	Bae I	BbsI
BbvC I	Blp I	BmgB I	Bpu10 I	Bsg I	BsiW I
BsmB I	BspQ I	BsrG I	BssH II	BstE II	BstZ17 I
EcoN I	Esp3 I	Fse I	Kas I	Msc I	Nar I
Nru I	PflM I	PluT I	Pme I	Pml I	PpuM I
PspX I	Sap I	Sbf I	Sfo I	SgrA I	Swa I
Xcm I

pCMV-N-Flag-Hyg中的单酶切位点(Restriction enzymes that cut pCMV-N-Flag-Hyg once)包括：

AccI	GT`MK,AC	1777	NheI	G`CTAG,C	1631
AleI	CACNN|NNGTG	1695	NotI	GC`GGCC,GC	1702
ApaI	G,GGCC`C	1806	PaeR7I	C`TCGA,G	1788
AsiSI	GCG,AT`CGC	3619	PciI	A`CATG,T	5534
BamHI	G`GATC,C	1746	PflFI	GACN`N,NGTC	3761
BcgI	NN`(N)10CGA(N)6TGC(N)10,NN`	639	PshAI	GACNN|NNGTC	3284
BclI	T`GATC,A	2042	PspOMI	G`GGCC,C	1806
BglII	A`GATC,T	1782	PstI	C,TGCA`G	1758
BmtI	G,CTAG`C	1631	PvuII	CAG|CTG	2883
BsaXI	NNN`(N)9AC(N)5CTCC(N)7,NNN`	2432	RsrII	CG`GWC,CG	3665
BseRI	GAGGAG(N)8,NN`	3201	SacI	G,AGCT`C	1685
BspDI	AT`CG,AT	3225	SacII	CC,GC`GG	1694
BstBI	TT`CG,AA	4298	SalI	G`TCGA,C	1776
BstXI	CCAN,NNNN`NTGG	1693	SfiI	GGCCN,NNN`NGGCC	3157
ClaI	AT`CG,AT	3225	SmaI	CCC|GGG	1741
CspCI	NN`(N)11CAA(N)5GTGG(N)10,NN`	1414	SnaBI	TAC|GTA	1380
EarI	CTCTTCN`NNN,	931	SpeI	A`CTAG,T	1800
Eco53kI	GAG|CTC	1687	SrfI	GCCC|GGGC	1741
EcoRI	G`AATT,C	1764	StuI	AGG|CCT	3206
EcoRV	GAT|ATC	1772	TspMI	C`CCGG,G	1739
HindIII	A`AGCT,T	1752	Tth111I	GACN`N,NGTC	3761
HpaI	GTT|AAC	2148	XbaI	T`CTAG,A	1794
MfeI	C`AATT,G	2135	XhoI	C`TCGA,G	1788
MluI	A`CGCG,T	2271	XmaI	C`CCGG,G	1739
NdeI	CA`TA,TG	1274	XmnI	GAANN|NNTTC	735

pCMV-N-Flag-Hyg质粒中对插入片段进行测序时，推荐使用的正向测序引物T3和反向测序引物T7的序列如下：

T3 primer (1654-1672): 5' AATTAACCCTCACTAAAGG 3'

T7 primer (1857-1875): 5' TAATACGACTCACTATAGG 3'

pCMV-N-Flag-Hyg的全序列信息:D2777 pCMV-N-Flag-Hyg-seq.txt

保存条件：

-20℃保存。

注意事项：

本质粒未经碧云天书面许可不得用于任何商业用途，也不得移交给订货人所在实验室外的任何个人或单位。

本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。