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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件:
零下80℃
- 保质期:
一年有效
- 库存:
现货
- 供应商:
上海经科化学科技有限公司
- 规格:
10×100μl/50×100μl
| 规格: | 10×100μl | 产品价格: | ¥366.0 |
|---|---|---|---|
| 规格: | 50×100μl | 产品价格: | ¥1496.0 |
产品简介:
碧云天生产的BJ5183超级感受态细胞,英文名BJ5183 Super Competent Cells,是一种专用于制备重组腺病毒质粒的E. coli BJ5183即用型化学感受态细胞。使用pUC19质粒进行热激活转化,转化效率可以高达5×108cfu/μg DNA以上。
腺病毒载体被广泛用于基因治疗,然而腺病毒基因组长达45kb,难以进行试管内分子操作。常用的策略是把目的基因构建至穿梭质粒(Shuttle vector)后,共转该穿梭质粒和带有腺病毒骨架载体(Adenoviral backbone vector)至细胞内,再以同源重组的方式将目的基因引入腺病毒载体。BJ5183菌株提供了两个载体同源重组的必需元件,可高效制备并扩增超螺旋状的重组腺病毒质粒。
BJ5183菌株的基因型为endA1 sbcBC recBC galK met thi-1 bioT hsdR (StrR)。其中sbcBC和recBC的双重突变,赋予其较强的重组能力,有利于转入的目的基因与腺病毒质粒的重组;endA1突变有利于质粒DNA的稳定[1];StrR使得该细胞具有硫酸链霉素抗性。
保存条件:
-80℃保存,一年内有效。避免反复冻融,通常制备6个月后转化效率随保存时间延长而逐渐降低。
注意事项:
感受态细胞禁止反复冻融,并应尽可能避免冻融,反复冻融会导致转化效率大幅下降。
感受态细胞融化后,须尽快加入待转化样品,不宜在无转化产物的情况下放置时间超过10分钟或以上时间,以免降低感受态细胞的转化效率。
待转化样品的体积通常不宜超过感受态细胞体积的10%,样品体积过大会导致转化效率下降。
感受态细胞对于温度变化非常敏感,需要避免出现不应有的使用说明之外的温度变化。
感受态细胞对于机械力非常敏感。加入待转化样品时应轻柔操作,不能使用移液枪吹打混匀。
通常仅建议取部分样品用于转化,这样万一遇到转化失败的情况,还留有样品可以再次进行转化。
本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
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文献和实验The Inoue Method for Preparation and Transformation of Competent E. coli: "Ultra Competent" Cells Joseph Sambrook Peter Maccallum Cancer Institute and The University of Melbourne
Generation of Recombinant Adenovirus Using the Escherichia coli BJ5183 Recombination System
here uses homologous recombination machinery of Escherichia coli BJ5183 to construct plasmids used in generation of adenoviral vectors. With this method, no ligation steps are involved in generating the plasmids, and any region of the adenoviral genome
一、材料与试剂 1. SOBor2xYT2. MES3. 足够80个管子的TFB(50 mL)/400转化DMSO4. 5 M NaCl 二、仪器 1. 离心机 三、步骤 1. 室温下在5 ml SOB或2×YT中接种菌并且培养过夜。2. 加过夜培养的菌到500 ml 的SOB或2×YT,其装在4L瓶中以最大限度的透气。加入36 ml 5 M 的NaCl,在30℃下培养。3. 大约3 h,OD600达到0.5。4. 离心细胞。取沉淀,吸取
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