腺苷-5′-二磷酸钠盐，SigmaA2754-1G

半胱氨酸cysteine

HSCH2 CH（ NH2 ） COOH，为含硫α -氨基酸之一，遇硝普盐（ nitroprusside）呈紫色（因 SH而显色），存在于许多蛋白质、谷胱甘肽中，与 Ag ， Hg ， Cu 等金属离子可形成不溶性的硫醇盐（ mercapti－ de）。即 R－ S－ M′， R－ S－ M″－ S－ R（ M′， M″各为 1价、 2价金属）。半胱氨酸是属于非必需氨基酸。在动物体内是从蛋氨酸和丝氨酸经过胱硫醚而合成。无机硫黄（来自硫酸盐）导入到半胱氨酸，在植物和细菌中

【分享】Rt-PCR经验总结

，使其失活。5. 其它：SDS、尿素、硅藻土等对RNA酶也有一定抑制作用。mRNA的分离与纯化真核细胞的mRNA分子最显著的结构特征是具有5’端帽子结构（m7G）和3’端的Poly(A)尾巴。绝大多数哺乳类动物细胞mRNA的3’端存在20-30个腺苷酸组成的Poly（A）尾，通常用Poly（A+）表示。这种结构为真核mRNA的提取，提供了极为方便的选择性标志，寡聚（dT）纤维素或寡聚（U）琼脂糖亲合层析分离纯化mRNA的理论基础就在于此。mRNA的分离方法较多，其中以寡聚（dT）-纤维素柱层析法最为有效

真核生物mRNA的纯化以及cDNA文库的构建

、蛋白质和细胞残片，通过酚、氯仿等有机溶剂处理，离心，使RNA与其它细胞组分分离开来,得到纯化的总RNA。哺乳动物平均每百万个细胞可含5-10ug RNA 。其中 rRNA占 80%-85%，tRNA占10%-16%，而mRNA仅占1%-5%。 mRNA分子种类繁多，分子量大小不均一,但绝大多数mRNA分子均在3′端存在20-250个多聚腺苷酸poly(A),利用此特性，用寡聚（ dT）亲和层析柱，很容易从总的RNA中纯化mRNA分子。2．cDNA的合成Oligo (dT)纤维素柱分离纯化的mRNA