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999
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亦高生物
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96992-100TESTS-F

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文献和实验)+ 0.5 ul 1 M DTT + 5 ul 200X 蛋白酶抑制剂混合物(PIC),冰上预冷。因此,我们就把所有体积乘以 3,来配制啦,简单的算术题。缓冲液 B(微球菌核酸酶的酶切缓冲液):我们按照实验设计,配了 3 个反应需要的体积,同时加入合适的 DTT(此处我们牢记不能加蛋白酶抑制剂混合物 PIC!!!)。其他:找到固定细胞用的分子生物学级别的 37% 甲醛溶液(我们用的是 SIGMA 生产的 F8775);准备足量预冷的 PBS,用于洗涤细胞;再把离心机也调到 4 度预冷。一切妥妥的,正式开始实验
)酶消化:在DMEM中混合IV型胶原酶(如Gibco17104019,0.2-2.5mg/mL)、DispaseII(如Gibco17105041,1mg/mL)和/或DNaseI(如Sigma-AldrichDN25,0.1mg/mL)制备酶消化溶液。将切碎的组织置于酶溶液中,37℃孵育30-60分钟,轻轻摇动以促进消化(使用温控摇床或GentleMACS™解离仪)。此步骤可分解细胞外基质,促进单个细胞的释放。 f)过滤:将消化后的组织悬液通过70μm细胞筛网过滤,去除未消化的碎片。确保只有单细胞
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