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- 2026年04月25日
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君礼生物科技（上海）有限公司
自噬过程:
■ 步骤1：细胞接受自噬诱导信号后，在胞浆的某处形成一个小的类似“脂质体”样的膜结构，然后不断扩张，但它并不呈球形，而是扁平的，就像一个由2层脂双层组成的碗，可在电镜下观察到，被称为Phagophore,是自噬发生的铁证之一。
■ 步骤2：Phagophore不断延伸，将胞浆中的任何成分，包括细胞器，全部揽入“碗”中，然后“收口”，成为密闭的球状的autophagosome，即“自噬体”。电镜下观察到自噬体是自噬发生的铁证之二。有两个特征:一是双层膜，二是内含胞浆成分，如线粒体、内质网碎片等。
■ 步骤3：自噬体形成后，可与细胞溶酶体发生融合(这种情况不是必然要发生的)
■ 步骤4：自噬体与溶酶体融合形成autolysosome,期间自噬体的内膜被溶酶体酶降解，两者的内容物合为一体，自噬体中的“货物”也被降解，产物(氨基酸、脂肪酸等)被输送到胞浆中，供细胞重新利用，而残渣或被排出细胞外或滞留在胞浆中。
自噬核心调控基因为：
▶正向：LC3、ATG5、ATG7、Beclin 1、Other ATG family proteins。
▶负向：无。
释放损伤相关分子：HMGB-1。
免疫特征：抗炎为主。
一、自噬的检测
1.透射电镜检测:
1）Phagophore的特征为:新月状或杯状，双层或多层膜，有包绕胞浆成分的趋势。
2）自噬体(AV1)的特征为:双层或多层膜的液泡状结构，内含胞浆成分，如线粒体、内质网、核糖体等。
3）自噬溶酶体(AV2)的特征为:单层膜，胞浆成分已降解。
▲自噬透射电镜图
2.WB检测标志物LC3/Atg8、p62/SQSTM1、Lamps、 Atg5、Atg14和Beclin-1；
▲ WB检测自噬标志物图
3.利用Western Blot检测LC3-II/I比值的变化以评价自噬形成。自噬形成时，胞浆型LC3(即LC3-I)会酶解掉一小段多肽，转变为(自噬体)膜型(即LC3-II)，因此，LC3-II/I比值的大小可估计自噬水平的高低；
▲WB检测自噬LC3比值变化
4.利用Western Blot检测p62蛋白来评价自噬以及自噬流的强弱:p62蛋白水平的多少与自噬流的强弱有着反比例关系；
5.mRFP-GFP-LC3双荧光自噬指示病毒系统检测；
mRFP-GFP用于标记及追踪LC3，GFP的减弱可指示溶酶体与自噬小体的融合形成自噬溶酶体，即由于GFP荧光蛋白对酸性敏感，当自噬体与溶酶体融合后GFP荧光发生淬灭,此时只能检测到红色荧光。
▲LC3自噬双标系统追踪自噬流不同阶段
▲mRFP-GFP-LC3双荧光自噬指示病毒系统检测感染细胞效果图
二、自噬相关检测&产品
实验服务流程
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文献和实验多功能蛋白，除了接受自噬信号，它还可以接受很多其它的信号对自噬进行调节。 3） P53 信号通路：在细胞核中，P53 能与多种蛋白作用，如 sestrin1/2 蛋白、DAPK1、BCL-2 家族、DRAM1 等作用，发挥上调细胞的自噬水平功能。而在细胞质中，P53 能够发挥抑制细胞自噬水平的功能。 自噬检测： LC3 是自噬标志物，自噬形成时，胞浆型 LC3（即 LC3-I）会酶解掉一小段多肽，转变为（自噬体）膜型（即 LC3-II），LC3-II/I 比值的大小可估计自噬
tianlang126 :(:(新手最近想做细胞自噬，想知道beclin1在自噬中起个什么样的作用？是不是表达beclin1就可以认为细胞发生了自噬？它和凋亡、坏死、炎症等有什么关系？它是通过什么信号通路起作用？ 希望各位大虾解解惑:8):8) 李一晶晶 你好，目前我也在做， 请问你做pcr没有啊，187338186，我的QQ guodanni
重新生成的，但具体的机制尚不清楚。 当beclin-1被活化后，胞浆中先形成很多个membrane source（自噬体膜发生中心），在它们不断扩展的过程中（phagophore到autolysosome），VMP1蛋白由内质网和高尔基体转位到自噬体膜上（VMP1又叫TMEM49，已知唯一与自噬有关的跨膜蛋白），同时，MAP1-LC3由胞浆型（即LC3-I）转位到自噬体膜（即LC3-II），LC3这一转变过程可被Western Blot和荧光显微镜检测到，现已成为监测自噬
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