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文献和实验2O,定容至100ml。 6、10%过硫酸铵(AP):1gAP加ddH2O至10ml。 7、2´SDS电泳上样缓冲液:1M Tris-HCl (pH6.8)2.5ml,b-巯基乙醇1.0ml,SDS0.6g,甘油2.0ml,0.1%溴酚兰1.0ml,ddH2O 3.5ml。 8、考马斯亮兰染色液:考马斯亮兰 0.25 g,甲醇225ml,冰醋酸46ml,ddH2O225ml。 9、脱色液:甲醇、冰醋酸、ddH2O以3∶1∶6配制而成。 二、操作步骤 采用垂直式电泳槽装置 (一)聚丙
【原创】Western-blotting:SDS-PAGE和免疫印迹
离心管中。于-20℃保存。4、根据上样量的多少,计算需要处理的样品,在处理样品时按照1:1比例加入2×buffer。于100℃煮5-10min。结束后短暂离心,于4℃备用。二、主要试剂的配制:1、30%丙烯酰胺溶液:取29.2g丙烯酰胺,0.8g甲叉双丙烯酰胺,加水至100ml,过滤,棕色瓶内避光4℃保存;2、1.5M Tris-HCl分离胶缓冲液,pH8.8 (4x):取18.15g Tris,用1M HCl调pH至8.8,加水至100ml,4℃保存;3、1.0M Tris-HCl在浓缩胶缓冲
,6000RPM离心15分钟,保留沉淀。 再次加入裂解液,超声破细胞后,加溶菌酶和Dnase, 上述过程重复三次。 用下述的溶液将包涵体悬浮,离心收集包涵体。 50mM Tris-HCl, pH 8.0 100mM NaCl 5mM EDTA 0.1% NaN3 用下述溶液悬浮包涵体,离心收集包涵体。 50mM Tris-HCl, pH 8.0 100mM NaCl 5mM EDTA 0.1% NaN3 1M 尿素 如暂时不用,放入-20℃保存。 包涵体的溶解
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