Leica-组织学石蜡，熔点56-58℃

IHC原理、操作及注意事项

的停留时间，透明的时间也应该控制缩短。对组织浸蜡时，一般选用 56℃~58℃ 熔点的石蜡，浸蜡温度最好不超过 60℃，防止抗原的损失。包埋时应选好角度动作迅速，以便切片时有完整的切面。切片时则要该快则快该慢则慢，及时检查刀片是否出现缺口，防止蜡带出现划痕。 脱蜡和水化 使组织恢复到固定后的正常状态暴露出抗原以方便与一抗结合。若脱蜡和水化不全易出现局灶性反应和浸洗不全，而产生非特异性背景着色。 抗原修复 由于组织在甲醛或多聚甲醛固定过程中，发生了蛋白之间交联及醛基的封闭作用，从而掩盖抗原

石蜡切片制备（取材与固定、水洗、脱水、透明、包埋）

水中，待表面石蜡凝固后立即将纸盒按入水中，使其迅速冷却凝固，30min后取出。 包埋用蜡的温度应略高于透蜡温度，保证组织块与周围石蜡完全融为一体。石蜡的迅速冷却也很重要，否则包埋块中将会产生结晶。以后切片时引起碎裂。 ①准备包埋蜡：一般应用硬蜡（56~58℃或60~62℃）为好，所用的石蜡要求透明无杂质，新的石蜡要反复熔凝，并有一定的粘韧性，可以加一些蜂蜡。蜡的熔点应与组织的硬度相适应。包埋用过的石蜡可以反复使用。 ②准备包埋框：可以用金属的，也可以用硬纸摺叠。 ③点燃酒精

组织化学与免疫组织化学染色标本的石蜡包埋

的石蜡中浸透，一般需经3次，每次0.5～1小时，其时间的长短与组织大小和结构有关，可以灵活掌握。浸蜡时间不能过长或不足。其结果与脱水、透明不充分或过长结果相似。用于HE染色的标本浸蜡和包埋的温度可限于65℃，而用于免疫组织化学的标本浸蜡和包埋温度不能高于60℃，否则高温在非缓冲体系下会破坏组织中抗原。因此最好选择低熔点软蜡(56～58℃)。《四》包埋浸透石蜡的组织块要人新的石蜡中冷却凝固，即包埋(embeding)。包埋时，包埋器中倒人熔化的新蜡，在其凝固之前迅速放人组织块，放人前要分清组织的各个面