Recombinant Human LAT

商品属性：

货号	XG-DB2488	种属	Human
宿主	E.Coli	表达区间	28-233
分子量	22.6 kDa	标签	N-terminal His Tag
规格	50μg、200ug、1mg	用途	仅供科研实验

商品介绍：

别称：36 kDa phospho tyrosine adapter protein, 36 kDa phospho-tyrosine adapter protein, 36 kDa phospho-tyrosine adaptor protein, lat, LAT 1, LAT_HUMAN, LAT1, Linker for activation of T cells, Linker for activation of T cells family member 1, linker for activation of T cells, transmembrane adaptor, Linker for activation of T-cells family member 1, p36 38, p36-38, pp36  纯度 Greater than 95% as determined by SDS-PAGE 应用  Western Blot, ELISA 性状  Lyophilized from a 0.2 μm filtered solution in 10 mM Hepes, 500 mM NaCl with 5% trehalose, pH7.4 溶解方法Centrifuge the vial at 10,000 rpm for 1 minute, reconstitute at 200 μg/ml in sterile distilled water by gentle pipetting 2-3 times, don’t vortex 存储 -20°C for 12 months as lyophilized; 2-8°C for 1 month under sterile conditions after reconstitution

表达、纯化、复性和定量，具体步骤如下：
一、重组蛋白质的诱导表达
1. 挑取转化有质粒的单菌落， 接种于 3ml 选择性 LB 液体培养基中， 37 oC，250 rpm/min 振摇培养过夜。
2. 次日将培养过夜的菌液 500 μl 再接种于 10ml（1:20）选择性 LB 液体培养基 中， 37 oC，250 rpm/min 振摇培养至光密度（OD600=0.6）时，取 1 ml 样本作 为诱导前标本， 10000g 离心 1min 收集菌体沉淀，－20 oC 冻存备用。
3. 加入 1 mol/L IPTG 于菌液中，使 IPTG 终浓度为 1 mM ，37 oC ，250 rpm/min 振摇培养 4 ～ 5 小时。取 1 ml 样本作为诱导后标本，同上法收集菌体沉淀， -20 oC 冻存备用。
4. 将诱导前后菌体沉淀用 20 ~ 40 μl PBS（pH= 8.0）重悬， 加入等体积的 2×SDS 上样缓冲液， 煮沸加热 5min，SDS 凝胶（SDS-PAGE）电泳分离 ， 考马斯亮蓝染色 3 小时后，脱色观察结果。
5. 选取诱导成功的细菌克隆，扩大诱导规模，收集菌体沉淀，于－ 20 oC 保存，准备做下一步分析及纯化。

二、重组蛋白质的分离纯化
重组蛋白质的可溶性鉴定
1. 将按上法诱导培养后收集的菌体重悬于裂解液 1 (Lysis buffer under native conditions )中，然后在－80 oC 低温冰箱中放置 10 min。
2. 冰中解冻。
3. 在冰浴上用超声破碎仪破菌 6 次， 每次 10 sec，间歇 10 sec，电压 200-300 V。
4. 10000g，4oC，离心 20min，取上清（为溶液 A）， － 20 oC 保存； 另将沉淀用 同样裂解液 1 溶解（为溶液 B），同样 －20 oC 保存，供后继分析使用。
5. 将上述 A、B 溶液和诱导前后的细菌进行 SDS-PAGE 电泳， 考马斯亮蓝染色， 比较分析重组蛋白质的溶解性。如果诱导表达的蛋白质位于 A 溶液中， 则为
可溶性蛋白；如果是在 B 溶液中，则为非可溶蛋白。
重组蛋白质为非可溶性蛋白（ 变性条件下）的分离纯化
1. 将菌体沉淀溶于适量裂解液 2（Lysis buffer under denaturing conditions ）中，室温下搅拌和吹打沉淀，避免泡沫生成。
2. 10000g ，4 oC，离心 30 min，收集上清液。
3. 将 Ni-NTAAgarose 充填柱子，并连接于 Pharmarcia 低压液相层析系统，用 5 倍柱体积的裂解液 2 平衡 Ni-NTAAgarose，调节 A280 值至零线。
4. 将适量上清液上样到 Ni-NTAAgarose 柱子中， 并用 lysis buffer 冲洗至 A280 值低于 0.01。
5. 分别用 5 ～ 10 倍柱体积的清洗液 1 和清洗液 2（Washbuffer 1 and 2）清洗柱 子，直至 A280 值低于 0.01。
6. 用洗脱液（Elution buffer）洗脱重组蛋白质， 在 A280 值监测下，收集出现峰 线后含有重组蛋白的所有洗脱液。
公司正在出售的产品：
BM液体培养基 250g 用于醋酸钙不动杆菌增菌培养  HPGD重组小鼠 HPGD / 15-PGDH 蛋白 (His 标签) Protein
O157显色培养基 O157 Chromogenic Medium 1000ml 用于O157菌的显色培养  Bcl2样蛋白11(BCL2L11)重组蛋白 Recombinant Bcl2 Like Protein 11 (BCL2L11)
酵母粉琼脂250g/瓶用于水中细菌总数的测定(ISO)incubationmedia酵母粉琼脂250g/瓶用于水中细菌总数的测定(ISO)  TMED1重组人 TMED1 蛋白 (Fc 标签) Protein
无菌病毒运输液(VTM) 3ml/支*36 用于甲流病毒标本运送  CCL8 Protein Human 重组人 CCL8 / MCP-2 蛋白 (SUMO 标签)
UVM培养基250g用于李氏菌的增菌培养(MERCK方法)  IL6ST Protein Rat 重组大鼠 gp130 / IL6ST / CD130 蛋白 (His 标签)
Bolton肉汤 Boltom Broth 用于空肠弯曲菌的增菌(GB2008标准)  CHODL重组小鼠 CHODL / Chondrolectin 蛋白 (His 标签) Protein
麦康克琼脂3号 Maconkey Agar No.3 250克 用于肠道致病菌的选择性分离、培养(OXOID方法)  Smad同源物7(Smad7)重组蛋白 Recombinant Mothers Against Decapentaplegic Homolog 7 (Smad7)
Mueller-Hinton琼脂250g/瓶用于细菌药敏试验incubationmediaMueller-Hinton琼脂250g/瓶用于细菌药敏试验  CNPY2重组人 CNPY2 蛋白 (His 标签) Protein
EnterobacteriaEnrichmentBroth  CCL8 Protein Human 重组人 CCL8 / MCP-2 蛋白 (SUMO 标签)
GramStaining  NOV Protein Cynomolgus 重组食蟹猴 / 恒河猴 CCN3 / NOV 蛋白 (His 标签)
Bordet-GengouAgarMedium  HAPLN1重组人 HAPLN1 蛋白 (His 标签) Protein
TBB 培养基 Tyrobutyricum Broth Base 250 用于乳酪产品中梭菌的计数(Merck方法)  神经营养因子4(NT4)重组蛋白 Recombinant Neurotrophin 4 (NT4)
MKTTn肉汤基础250g/瓶用于沙门氏菌选择性增菌(ISO)，每培养基中添加03生霉素4mgincubationmediaMKTTn肉汤基础250g/瓶用于沙门氏菌选择性增菌(ISO)，每培养基中添加03生霉素4mg  RNF43重组人 RNF43 蛋白 (Fc 标签) Protein
BCYE琼脂平板(9cm) 10个/包 用于军团菌的选择性分离培养  CCNA1 Protein Human 重组人 CCNA1 / Cyclin-A1 蛋白 (His 标签)
葡萄糖铵培养基250g用于志贺氏菌的葡萄糖铵试验(GB标准)  HA Protein Influenza 重组甲型流感 H6N1 (A/northern shoveler/California/HKWF115/2007) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 蛋白 (His 标签)
Bordet-GengouAgarMedium  CD200重组食蟹猴 CD200 蛋白 (His 标签) Protein
孟加拉红培养基 Rose Bengal Medium 250 用于食品中霉菌及酵母菌总数测定  Leptin 瘦素(抗原 0.5mgLeptin 瘦素(抗原)
NLN基本培养基(Lichter，250g/瓶用于植物组织培养incubationmediaNLN基本培养基(Lichter，250g/瓶用于植物组织培养  CD59重组人 CD59 蛋白 (His 标签) Protein
Broth  CCNE1 Protein Human 重组人 CCNE1 / Cyclin-E1 蛋白
WS琼脂250g用于沙门氏菌的选择性分离(GB标准)  IL1R1 Protein Mouse 重组小鼠 IL1R1 / CD121a 蛋白 (Fc 标签)
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尿素酶琼脂基础 Urease Agar Base 250 生化培养基，用于细菌脲酶检测(GB、SN标准)  Erdj5/DNAJC10 Erdj5/DNAJC10多肽 0.5mgErdj5/DNAJC10 Erdj5/DNAJC10多肽
Recombinant Human LATKC培养基250g/瓶用于兰花各属无菌种子发芽和组织培养incubationmediaKC培养基250g/瓶用于兰花各属无菌种子发芽和组织培养  PIN1重组人 PIN1 / Rotamase Pin1 蛋白 Protein
10%NaClTrypticaseSoy Broth  CCNE1 Protein Human 重组人 CCNE1 / Cyclin-E1 蛋白 (His & GST 标签)
副溶血性弧菌成套生化鉴定管(HRGB)9种*2套/盒*5盒用于副溶血性弧菌生化鉴定试验  CLU Protein Mouse 重组小鼠 Clusterin / Apolipoprotein J / Apo-J / CLU 蛋白 (His 标签)
重组蛋白的制备涉及多个步骤，包括基因克隆、表达系统选择和蛋白纯化：
● 基因克隆：基因克隆是将目标基因导入表达载体中的过程。研究人员可以选择不同的克隆方法，如限制性酶切克隆、PCR扩增克隆等，根据需要构建目标基因的DNA序列。
● 表达系统选择：选择适合的表达系统是重组蛋白制备的关键一步。常用的表达系统包括大肠杆菌、酵母、昆虫细胞和哺乳动物细胞。每种表达系统都具有不同的优缺点，适用于不同类型的蛋白质表达。
5大蛋白表达系统：

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