Recombinant Human Glutamine Sy

商品属性：

货号	XG-DB2110	种属	Human
宿主	E.Coli	表达区间	1-373
分子量	40.9 kDa	标签	N-terminal His Tag
规格	50μg、200ug、1mg	用途	仅供科研实验

商品介绍：

别称：cell proliferation-inducing protein 59, Cgl2214, GLNA, GLNA_HUMAN, GLNS, GLUL, Glutamate ammonia ligase, Glutamate decarboxylase, Glutamate--ammonia ligase, glutamine synthase, Glutamine synthetase, glutamine synthetase I, GS, PIG 43, PIG 59, PIG43, PIG59, Proliferation inducing protein 43  纯度 Greater than 95% as determined by SDS-PAGE 应用  Western Blot, ELISA 性状  Lyophilized from a 0.2 μm filtered solution in 10 mM Hepes, 500 mM NaCl with 5% trehalose, pH7.4 溶解方法Centrifuge the vial at 10,000 rpm for 1 minute, reconstitute at 200 μg/ml in sterile distilled water by gentle pipetting 2-3 times, don’t vortex 存储 -20°C for 12 months as lyophilized; 2-8°C for 1 month under sterile conditions after reconstitution

表达、纯化、复性和定量，具体步骤如下：
一、重组蛋白质的诱导表达
1. 挑取转化有质粒的单菌落， 接种于 3ml 选择性 LB 液体培养基中， 37 oC，250 rpm/min 振摇培养过夜。
2. 次日将培养过夜的菌液 500 μl 再接种于 10ml（1:20）选择性 LB 液体培养基 中， 37 oC，250 rpm/min 振摇培养至光密度（OD600=0.6）时，取 1 ml 样本作 为诱导前标本， 10000g 离心 1min 收集菌体沉淀，－20 oC 冻存备用。
3. 加入 1 mol/L IPTG 于菌液中，使 IPTG 终浓度为 1 mM ，37 oC ，250 rpm/min 振摇培养 4 ～ 5 小时。取 1 ml 样本作为诱导后标本，同上法收集菌体沉淀， -20 oC 冻存备用。
4. 将诱导前后菌体沉淀用 20 ~ 40 μl PBS（pH= 8.0）重悬， 加入等体积的 2×SDS 上样缓冲液， 煮沸加热 5min，SDS 凝胶（SDS-PAGE）电泳分离 ， 考马斯亮蓝染色 3 小时后，脱色观察结果。
5. 选取诱导成功的细菌克隆，扩大诱导规模，收集菌体沉淀，于－ 20 oC 保存，准备做下一步分析及纯化。

二、重组蛋白质的分离纯化
重组蛋白质的可溶性鉴定
1. 将按上法诱导培养后收集的菌体重悬于裂解液 1 (Lysis buffer under native conditions )中，然后在－80 oC 低温冰箱中放置 10 min。
2. 冰中解冻。
3. 在冰浴上用超声破碎仪破菌 6 次， 每次 10 sec，间歇 10 sec，电压 200-300 V。
4. 10000g，4oC，离心 20min，取上清（为溶液 A）， － 20 oC 保存； 另将沉淀用 同样裂解液 1 溶解（为溶液 B），同样 －20 oC 保存，供后继分析使用。
5. 将上述 A、B 溶液和诱导前后的细菌进行 SDS-PAGE 电泳， 考马斯亮蓝染色， 比较分析重组蛋白质的溶解性。如果诱导表达的蛋白质位于 A 溶液中， 则为
可溶性蛋白；如果是在 B 溶液中，则为非可溶蛋白。
重组蛋白质为非可溶性蛋白（ 变性条件下）的分离纯化
1. 将菌体沉淀溶于适量裂解液 2（Lysis buffer under denaturing conditions ）中，室温下搅拌和吹打沉淀，避免泡沫生成。
2. 10000g ，4 oC，离心 30 min，收集上清液。
3. 将 Ni-NTAAgarose 充填柱子，并连接于 Pharmarcia 低压液相层析系统，用 5 倍柱体积的裂解液 2 平衡 Ni-NTAAgarose，调节 A280 值至零线。
4. 将适量上清液上样到 Ni-NTAAgarose 柱子中， 并用 lysis buffer 冲洗至 A280 值低于 0.01。
5. 分别用 5 ～ 10 倍柱体积的清洗液 1 和清洗液 2（Washbuffer 1 and 2）清洗柱 子，直至 A280 值低于 0.01。
6. 用洗脱液（Elution buffer）洗脱重组蛋白质， 在 A280 值监测下，收集出现峰 线后含有重组蛋白的所有洗脱液。
公司正在出售的产品：
肠道菌增菌肉汤(EE) 1000(g) incubation media 肠道菌增菌肉汤(EE) 1000(g)  FCGR3A重组人 CD16a / FCGR3A 蛋白 (176 Phe, His 标签) Protein
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BPLSAgar  HA Protein H12N1 重组甲型流感 H12N1 (A/mallard duck/Alberta/342/1983) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白 (His 标签)
肠道菌增菌肉汤(EE) 250(g) incubation media 肠道菌增菌肉汤(EE) 250(g)  FCGRT & B2M重组食蟹猴 FCGRT & B2M Heterodimer 蛋白 Protein
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WORT琼脂250用于真菌,特别是酵母菌的计数和增菌培养(Merck方法)incubationmediaWORT琼脂250用于真菌,特别是酵母菌的计数和增菌培养(Merck方法)  CLIC4重组人 CLIC4 蛋白 (His 标签) Protein
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腊样芽孢杆菌选择琼脂基础250g用于腊样芽孢杆菌选择性分离培养  SEMA5A Protein Mouse 重组小鼠 Semaphorin 5A / SEMA5A 蛋白 (His 标签)
肠道菌增菌肉汤(EE) Enterobacteria Enrichment Broth 用于肠道菌的增菌培养(GB标准)  SELE重组大鼠 E-Selectin / CD62e / SELE 蛋白 (Fc 标签) Protein
改良马丁琼脂培养基 Martin Agar Medium ,Modified 250 用于生物制品霉菌无菌检验  DDC (DOPA decarboxylase 0.5mgDDC (DOPA decarboxylase) 多巴胺脱羧酶(抗原)
碱性蛋白胨水APW250g/瓶用于嗜水气单胞菌增菌incubationmedia碱性蛋白胨水APW250g/瓶用于嗜水气单胞菌增菌  TNFSF10重组人 TNFSF10 / TRAIL / APO-2L / CD253 蛋白 Protein
mEC肉汤 250g 用于0157选择性增菌(USDA-FSIS方法)  JAM3 Protein Human 重组人 JAM3 / JAM-C 蛋白 (Fc 标签)
SulfiteCycloserineAgarBase  TLR3 Protein Mouse 重组小鼠 TLR3 / CD283 蛋白 (His 标签)
肠毒素产毒培养基 Enterotoxin toxin-producing medium 用于球菌肠毒素产毒试验  FCGR3重组食蟹猴 CD16 / FCGR3 蛋白 (His & AVI 标签), Biotinylated Protein
BCYE 琼脂(Legionella 琼脂) BCYE Agar(Legionella Agar) 250 用于军团菌的选择性分离培养(OXOID方法)  MRP3(Multidrug Resistanec-Associated Protein 3 0.5mgMRP3(Multidrug Resistanec-Associated Protein 3) 多药耐药相关蛋白3(抗原)
Recombinant Human Glutamine Synthetase哥伦比亚琼脂培养基250g/瓶用于梭菌的检验，每培养基中添加0ncubationmedia哥伦比亚琼脂培养基250g/瓶用于梭菌的检验，每培养基中添加0102  HSPD1重组人 HSPD1 / HSP60 蛋白 (His & GST 标签) Protein
MR-VP培养基 250g 用于大肠杆菌的甲基红和VP试验(SN标准)  JTB Protein Human 重组人 Jumping Translocation Breakpoint / JTB 蛋白 (Fc 标签)
抗生素检定培养基2号(高PH)(05药典)250g用于林克霉素，克林霉素等效价测定(05药典)  SMAD5 Protein Mouse 重组小鼠 Smad5 蛋白 (His & GST 标签)
重组蛋白的制备涉及多个步骤，包括基因克隆、表达系统选择和蛋白纯化：
● 基因克隆：基因克隆是将目标基因导入表达载体中的过程。研究人员可以选择不同的克隆方法，如限制性酶切克隆、PCR扩增克隆等，根据需要构建目标基因的DNA序列。
● 表达系统选择：选择适合的表达系统是重组蛋白制备的关键一步。常用的表达系统包括大肠杆菌、酵母、昆虫细胞和哺乳动物细胞。每种表达系统都具有不同的优缺点，适用于不同类型的蛋白质表达。
5大蛋白表达系统：

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