Akata EBV转化淋巴细胞系

Akata EBV转化淋巴细胞系

产品编号：CL-532h

一、细胞介绍

从一名患有伯基特淋巴瘤的日本患者身上建立的爱泼斯坦-巴尔病毒（EBV）产生细胞系。

二、细胞特性

来源：人，淋巴瘤

形态：淋巴母细胞，悬浮生长

含量：>1x10⁶cells

规格：T25瓶x1（常温运输）/ 含有1mL细胞悬液的冻存管x2（干冰运输）

用途：本产品仅供实验室研究使用，不可用于动物或人类治疗或诊断用途

三、完全培养基及冻存液配制

1) 该细胞完全培养基为：89%RPMI-1640＋10%优质胎牛血清＋1%青霉素-链霉素

2) 培养环境：37℃，95% Air，5% CO₂

3) 冻存液：90%血清+10%DMSO，现用现配

四、收货注意事项

1) 收到细胞后，请检查发货培养瓶的状况，若发现培养瓶破损、有液体溢出及细胞有污染，冻存细胞若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落，请拍照后及时与我们联系。

2) 在显微镜下确认细胞生长状态时，最好在低倍镜（4或5X物镜)下进行，能准确判断细胞的传代密度。看细胞的形态请在10X和20×物镜下，同时给刚收到的细胞拍照，（10×，20×）各2-3张以及培养瓶外观照片一张留存，作为细胞需要售后时提供收到细胞时细胞状态的依据。

3) 对于悬浮生长的细胞：若细胞密度超过80%，则可以根据以下提供的细胞培养步骤进行传代或冻存；若细胞密度未达到80%，可收集细胞悬液离心，去除上清，加入 6mL 完全培养基，放入细胞培养

箱中继续培养。

 

细胞培养操作步骤

一、细胞复苏

1. 将含有1mL细胞悬液的冻存管快速放入37℃水浴中解冻，轻轻摇晃加速溶解，直至冻存管中无结晶，然后用75%酒精擦拭冻存管外壁。

2. 将冻存管内容物加入到含有5mL完全培养基的离心管中混合均匀，1000rpm离心5min。

3. 弃去上清液，用1-2mL完全培养基重悬细胞，接种到含有6-8mL完全培养基的T25瓶中，放入培养箱中培养。

4. 第二天换液并检查细胞密度。

注意：在复苏冻存细胞时始终使用防护手套、衣服和佩戴防护面罩，避免冻存管爆炸造成人员伤害。

二、细胞传代：细胞密度达80%-90%，即可进行传代

悬浮状态下生长的细胞，可以通过向培养瓶中添加完全培养基来维持细胞的生长状态，一般情况下细胞密度维持在1×10⁵~1×10⁶个/mL（不同细胞对密度要求不同）可以维持细胞的正常生长。

如需分瓶可以将细胞悬液收集到离心管中1000rpm，离心5min，弃去上清，补加1-2mL培养液后重悬混匀后将细胞悬液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8mL新的完全培养基以保持细胞的生长活力，后续传代根据实际情况按1:2~1:5的比例进行。

三、细胞冻存

收到细胞后建议在培养前3代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。步聚如下：

1. 细胞冻存时按照细胞传代的过程收集消化好的细胞到离心管中，可使用血球计数板计数，来决定细胞的冻存密度。一般细胞的推荐冻存密度为1×10⁶~1×10⁷个活细胞/mL。

2. 1000rpm离心3-5min，去掉上清，用细胞冻存液重悬细胞，按每1mL冻存液含1×10⁶~1×10⁷个活细胞/mL分配到一个冻存管中，标注好名称、代数、日期等信息。

3. 将要冻存的细胞放入程序降温盒中，-80℃冰箱中过夜，之后转入液氮容器中储存。同时记录好冻存管在液氮容器中的位置以便后续查阅和使用。

注意事项：

所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全柜内操作，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。