NCI-H69 人小细胞肺癌细胞

NCI-H69 人小细胞肺癌细胞

产品编号：CL-620h

细胞特性

含量：>1x106cells；

生长特性：悬浮生长；

细胞形态：悬浮，淋巴母细胞样，圆形聚团；

规格：T25瓶或者2mL冻存管包装；

用途：仅供科研使用。

细胞运输、保存及注意事项

	复苏细胞	冻存细胞
包装	充液的T25细胞培养瓶	2mL冻存管
运输条件	常温	干冰
保存方式	75%酒精消毒瓶壁，置于37℃恒温细胞培养箱	-80℃冰箱中保存过夜后转入液氮/立即复苏
注意事项	①　收到细胞后，75%酒精消毒瓶壁，将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h，若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染，请拍照后及时联系我们； ②　请在4或5X显微镜下确认细胞状态，同时给刚收到的细胞拍照，10X和20X各2-3张以及培养瓶外观照片一张留存，作为售后时收到时细胞状态的依据； ③　半贴细胞或贴壁不牢（悬浮）细胞：T25瓶置于37℃培养箱中约2-3h，显微镜下观察细胞的情况，若细胞密度在60%以下，客户需收集T25瓶中的悬浮细胞离心后用完全培养基重悬后打回到原培养瓶中继续培养，若细胞生长70%-90%对细胞进行传代，传代时需要收集培养基中悬浮的细胞离心后回收； ④　运输用的培养基（灌液培养基）不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。收到细胞后第一次传代建议T25培养瓶1：2传代。

 培养条件

完全培养基	RPMI-1640＋10% FBS＋1% P/S
培养条件	培养温度37℃；气体环境5%CO2+95%空气；
冻存液	50%基础培养基+40%FBS+10%DMSO

 

 

细胞复苏、传代、冻存操作

（一）冻存细胞的复苏

① 将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入到含4~6mL完全培养基的离心管中混合均匀，1000rpm/min离心3~5min，弃去上清液。加入1mL完全培养基重悬细胞后，均匀铺于含6~8mL完全培养基的培养瓶（或皿）中，置于37℃恒温细胞培养箱中过夜培养。第二天显微镜下观察细胞生长情况。

② 细胞传代：如果细胞密度达70%-90%，即可进行传代培养。

注意：建议复苏冻存细胞时始终使用防护手套、衣服和戴上防护面罩，避免冻存管处于温差较大情况下发生爆炸造成人员伤害。

（二）该细胞轻微贴壁和悬浮培养的细胞，传代可以参考以下方法：

①　收集：将培养瓶中的悬浮的细胞收集到离心管中。用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。由于细胞贴壁不牢PBS润洗后细胞会脱落所以PBS也要回收到离心管中。

②　加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培养瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL）置于37℃培养箱中消化1-2分钟（难消化的细胞可以适当延长消化时间），然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加入3-4ml含10%FBS的培养基来终止消化。

③ 将收集到的悬浮细胞、pbs清洗液中的细胞和消化下来的贴壁细胞以1000rpml离心5min，弃去上清，补加1-2mL培养液后重悬混匀后将细胞悬液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照说明书要求配置的新的完全培养基以保持细胞的生长活力，后续传代根据实际情况按1:2~1:5的比例进行。

（三）细胞冻存

①　细胞冻存时，步骤同细胞传代的①~④，细胞计数后，加入配制好的细胞冻存液，重悬细胞，按照1×106 ~ 1×107个细胞/mL分配到一个冻存管中，标注好名称、代数、日期等信息。

②　将要冻存的细胞置于程序降温盒中，-80℃冰箱中过夜，之后转入液氮容器中储存。同时记录好冻存管在液氮容器中的位置以便后续查阅和使用。

注意事项：

所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。

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