Recombinant Human RNA polymera

重组蛋白的制备涉及多个步骤，包括基因克隆、表达系统选择和蛋白纯化：
● 基因克隆：基因克隆是将目标基因导入表达载体中的过程。研究人员可以选择不同的克隆方法，如限制性酶切克隆、PCR扩增克隆等，根据需要构建目标基因的DNA序列。
● 表达系统选择：选择适合的表达系统是重组蛋白制备的关键一步。常用的表达系统包括大肠杆菌、酵母、昆虫细胞和哺乳动物细胞。每种表达系统都具有不同的优缺点，适用于不同类型的蛋白质表达。
5大蛋白表达系统：
商品属性：

货号	XG-DB3255	种属	Human
宿主	E.Coli	表达区间	1-117
分子量	12.8 kDa	标签	N-terminal His Tag
规格	50μg、200ug、1mg	用途	仅供科研实验

商品介绍：

别称：DNA directed RNA polymerase II subunit RPB11 a, DNA-directed RNA polymerase II 13.3 kDa polypeptide, DNA-directed RNA polymerase II subunit J 1, DNA-directed RNA polymerase II subunit J-1, DNA-directed RNA polymerase II subunit RPB11-a, hRPB 14, hRPB14, POLR 2J1, POLR2J, POLR2J1, polymerase (RNA) II (DNA directed) polypeptide J 13.3kDa, RNA polymerase II 13.3 kDa subunit, RNA polymerase II subunit B11 a  纯度 Greater than 95% as determined by SDS-PAGE 应用  Western Blot, ELISA 性状  Lyophilized from a 0.2 μm filtered solution in 10 mM Hepes, 500 mM NaCl with 5% trehalose, pH7.4 溶解方法Centrifuge the vial at 10,000 rpm for 1 minute, reconstitute at 200 μg/ml in sterile distilled water by gentle pipetting 2-3 times, don’t vortex 存储 -20°C for 12 months as lyophilized; 2-8°C for 1 month under sterile conditions after reconstitution

表达、纯化、复性和定量，具体步骤如下：
一、重组蛋白质的诱导表达
1. 挑取转化有质粒的单菌落， 接种于 3ml 选择性 LB 液体培养基中， 37 oC，250 rpm/min 振摇培养过夜。
2. 次日将培养过夜的菌液 500 μl 再接种于 10ml（1:20）选择性 LB 液体培养基 中， 37 oC，250 rpm/min 振摇培养至光密度（OD600=0.6）时，取 1 ml 样本作 为诱导前标本， 10000g 离心 1min 收集菌体沉淀，－20 oC 冻存备用。
3. 加入 1 mol/L IPTG 于菌液中，使 IPTG 终浓度为 1 mM ，37 oC ，250 rpm/min 振摇培养 4 ～ 5 小时。取 1 ml 样本作为诱导后标本，同上法收集菌体沉淀， -20 oC 冻存备用。
4. 将诱导前后菌体沉淀用 20 ~ 40 μl PBS（pH= 8.0）重悬， 加入等体积的 2×SDS 上样缓冲液， 煮沸加热 5min，SDS 凝胶（SDS-PAGE）电泳分离 ， 考马斯亮蓝染色 3 小时后，脱色观察结果。
5. 选取诱导成功的细菌克隆，扩大诱导规模，收集菌体沉淀，于－ 20 oC 保存，准备做下一步分析及纯化。

二、重组蛋白质的分离纯化
重组蛋白质的可溶性鉴定
1. 将按上法诱导培养后收集的菌体重悬于裂解液 1 (Lysis buffer under native conditions )中，然后在－80 oC 低温冰箱中放置 10 min。
2. 冰中解冻。
3. 在冰浴上用超声破碎仪破菌 6 次， 每次 10 sec，间歇 10 sec，电压 200-300 V。
4. 10000g，4oC，离心 20min，取上清（为溶液 A）， － 20 oC 保存； 另将沉淀用 同样裂解液 1 溶解（为溶液 B），同样 －20 oC 保存，供后继分析使用。
5. 将上述 A、B 溶液和诱导前后的细菌进行 SDS-PAGE 电泳， 考马斯亮蓝染色， 比较分析重组蛋白质的溶解性。如果诱导表达的蛋白质位于 A 溶液中， 则为
可溶性蛋白；如果是在 B 溶液中，则为非可溶蛋白。
公司正在出售的产品：
白介素-20受体a   英文名称：    ierleukin-20 receptor a      英文缩写：   IL-20Ra    FGFR2(Fibroblast Growth Factor Receptor 2 0.5mgFGFR2(Fibroblast Growth Factor Receptor 2) 成纤维细胞生长因子受体2抗原
白介素-21   英文名称：    ierleukin-21      英文缩写：   IL-21    LGALS1重组大鼠 Galectin-1 / LGALS1 蛋白 Protein
白介素-22   英文名称：   ierleukin-22      英文缩写：   IL-22    HFE2 Protein Human 重组人 Hemojuvelin / HFE2 蛋白 (His 标签)
白介素-1RⅠ   英文名称：    ierleukin-1RⅠ      英文缩写：   IL-1RⅠ    CSTA重组人 Cystatin A / CSTA 蛋白 (His 标签) Protein
白介素-1受体样1   英文名称：   Human Ierleukin-1 Receptor Like-1      英文缩写：   IL-1RL1    NGF Protein Human 重组人 β-NGF / Beta-NGF 蛋白
白介素-1RⅡ   英文名称：    ierleukin-1RⅡ      英文缩写：   IL-1RⅡ    TNF-alpha 坏死因子-α抗原 0.5mgTNF-alpha 坏死因子-α抗原
白介素-2   英文名称：    ierleukin-2      英文缩写：   IL-2    LON PROTEASE重组大肠杆菌 Lon protease 蛋白 (His 标签) Protein
白介素-18   英文名称：    ierleukin-18      英文缩写：   IL-18    AMY2B Protein Human 重组人 AMY2B 蛋白 (Fc 标签)
白介素-18结合蛋白   英文名称：    ierleukin-18 binding protein      英文缩写：   IL-18BP    TNK2重组人 ACK1 / TNK2 蛋白 (GST 标签) Protein
可溶性白介素-18受体   英文名称：    soluble ierleukin-18 recepor      英文缩写：   sIL-18R    KLK11 Protein Human 重组人 KLK11 / Kallikrein-11 蛋白 (His 标签)
白介素-19   英文名称：    ierleukin-19      英文缩写：   IL-19    Wnt1 信号通路Wnt1抗原 0.5mgWnt1 信号通路Wnt1抗原
白介素-13   英文名称：    ierleukin-13      英文缩写：   IL-13    考马斯亮蓝染色液 125ml*2
白介素-13受体a1   英文名称：    ierleukin-13 receptor a1      英文缩写：   IL-13RA1    整合素αV(ITGαV)重组蛋白 Recombinant Integrin Alpha V (ITGaV)
白介素-15   英文名称：    ierleukin-15      英文缩写：   IL-15    IL4R重组人 IL4R / CD124 蛋白 (His 标签) Protein
白介素-16   英文名称：    ierleukin-16      英文缩写：   IL-16    SELP Protein Cynomolgus 重组食蟹猴 / 恒河猴 SELP / selectin P / P-selectin 蛋白 (His 标签)
Recombinant Human RNA polymerase II RPB11白介素-11   英文名称：    ierleukin-11      英文缩写：   IL-11    RNA结合基元蛋白24(RBM24)重组蛋白 Recombinant RNA Binding Motif Protein 24 (RBM24)
白介素-12   英文名称：    ierleukin-12      英文缩写：   IL-12    KLRB1F重组小鼠 KLRB1F / NKR-P1F 蛋白 (Fc 标签) Protein
白介素-12p40   英文名称：    ierleukin-12 p40      英文缩写：   IL-12 p40    BTK Protein Human 重组人 Bruton Tyrosine Kinase / BTK Kinase 蛋白 (His 标签)
白介素-12p70   英文名称：    ierleukin-12 p70      英文缩写：   IL-12 p70    GIF重组人 Gastric intrinsic factor / GIF 蛋白 (His 标签) Protein
重组蛋白质为非可溶性蛋白（ 变性条件下）的分离纯化
1. 将菌体沉淀溶于适量裂解液 2（Lysis buffer under denaturing conditions ）中，室温下搅拌和吹打沉淀，避免泡沫生成。
2. 10000g ，4 oC，离心 30 min，收集上清液。
3. 将 Ni-NTAAgarose 充填柱子，并连接于 Pharmarcia 低压液相层析系统，用 5 倍柱体积的裂解液 2 平衡 Ni-NTAAgarose，调节 A280 值至零线。
4. 将适量上清液上样到 Ni-NTAAgarose 柱子中， 并用 lysis buffer 冲洗至 A280 值低于 0.01。
5. 分别用 5 ～ 10 倍柱体积的清洗液 1 和清洗液 2（Washbuffer 1 and 2）清洗柱 子，直至 A280 值低于 0.01。
6. 用洗脱液（Elution buffer）洗脱重组蛋白质， 在 A280 值监测下，收集出现峰 线后含有重组蛋白的所有洗脱液。