Edman转膜PVDF步骤

Edman降解法（Edman degradation）测序实验中，经过SDS-PAGE电泳分离后的蛋白质样品需经过“转膜”步骤，从PAGE胶转移到PVDF膜上固定，才能接着使用Edman降解法进行下一步的测序。

 

转膜是将蛋白胶上的样品转移至PVDF膜上，是Edman降解法测序样品准备过程，这是对最终的测序结果影响较大的一步，转膜质量的好坏直接决定了测序的数据分析结果。因此，Edman转膜步骤不容忽视。为了防止没有电场的情况下已经分离的蛋白条带扩散，转膜要尽快进行，其具体操作如下所述：

1、PVDF膜处理：取出PVDF膜，用甲醇浸泡数秒钟后放入CAPS电印迹缓冲液中防止膜干涸；

2、凝胶处理：将电泳凝胶取出放入电印迹缓冲液中处理5-10分钟；

3、安装转印槽子：将滤纸和海绵放入电印迹缓冲液中浸泡一下，依次按照海绵、滤纸、PVDF膜、凝胶、滤纸、海绵的次序将电印迹夹层装好，并放入小型电转槽中；

4、电印迹转移：于转印条件下（50V，100-170mA）室温进行电印迹转移，转移时间一般为5-2小时（根据蛋白质具体分子量大小而定）；

5、PVDF膜染色前处理：取出PVDF膜并用去离子水漂洗，用甲醇浸泡数秒钟，然后进行染色；

6、膜染色：染色剂（如考马斯亮蓝染色）30-50秒（切勿超过1分钟)，50%甲醇脱色（勤换脱色液），最后用去离子水充分洗涤后晾干即可。

 

百泰派克生物科技采用岛津公司Edman测序系统，为广大科研工作者和科研客户提供基于Edman降解的蛋白质N端测序服务。采用我们的测序系统，可以测定N端30个氨基酸的序列信息。采用特定的蛋白上样系统，可以测定N端的60-70个氨基酸。百泰派克生物科技也建立了以先进的LC-MS/MS技术进行N-端测序的平台，可以测出封闭和修饰的蛋白质末端，与基于Edman降解的蛋白质N端测序形成互补，保证N端测序服务的顺利进行。

 

其他服务项目

 

优质检测平台

（1）基于生物化学、分子生物学、色谱的检测分析平台

该平台配备了Agilent 2100 生物分析仪、ProteinSimple凝胶成像系统、高效液相色谱系统，为蛋白质组学、代谢组学分析保驾护航，包括样品制备、分离纯化分子量测量、杂质表征表达研究等:

（2）基于质谱技术的蛋白质组学分析平台、代谢组学分析平台、蛋白测序平台

该平台配备了超高效液相色谱质谱联用，Orbitrap Fusion Lumos Tribri,Thermo Scientific Exploris以及氢气交换质谱仪配合机械臂为蛋白贡组学、代谢组学和蛋白测序提供了全面的分析手段，包括蛋白质和代谢物的分离、质谱分析、结构分析以及动态信息研究;

（3）生物药物表征平台

该平台配备了DSC-FTRR差示扫描量热仪与傅立叶变换拉曼光谱仪，氢气交换质谱仪配备机械臂，为生物药物表征提供了全面的分析手段，包括生物药物的分离、纯化、结构分析和动态信息研究:

（4）基于10x Genomics的单细胞分析平台

该平台能够完成基于10x Genomics单细胞分析平台的检测流程包括单细胞分选、cDNA合成、文库制备、文库质量检测、PCR扩增以及高通量测序;

（5）基于Fluidigm的单细胞质谱流式检测平台

采用基于Fluidigm Helios流式细胞仪(Mass Cytometry Systemfor Single Cell Analysis)用于单细胞质谱分析，该平台能够完成包括单细胞捕获、cDNA合成、实时定量PCR分析、目标区域扩增以及质谱流式细胞分析;

（6）基于高精度质谱的免疫多肽组学及免疫学检测平台

基于高精度质谱的免疫多肽组学及免疫学检测平台，能够完成包括多肽分离、纯化、合成、质谱分析、免疫学检测以及分子相互作用研究;

（7）生信云平台

基于生物信息分析方法的生信云平台，能够完成一整套的生物信息学解决方案，包括组学数据的质量分析、差异表达分析、差异表达物GO、KEGG、COG注释分析、聚类分析、相互作用网络等多层次网络和通路的分析。

 

百泰派克生物科技-生物制品表征，生物质谱多组学优质服务商

北京百泰派克生物科技有限公司(Beiing Bio-Tech Pack Technology Company Ltd.简称BTP)从事以生物质谱为依托的生物药物表征，大分子物质(包括蛋白质、多肽、代谢物)质谱分析以及小分子物质检测服务。

公司采用IS09001质量控制体系，zhuānyè提供以质谱为基础的CRO检测分析服务;

获国家CNAS实验室认可，为客户提供符合全球药政法规的药物质量研究服务;

业务范围覆盖蛋白质组学、多肽组学、代谢组学、生物药物表征、单细胞分析、单细胞质谱流式、生信云分析以及多组学生物质谱整合分析等;

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