如何查找质谱结果中的磷酸化位点

磷酸化蛋白组的研究内容中，位点分析是最重要的一个环节。不同磷酸化位点在生物学进程和分子功能上有不同的生物学意义。

 

由于大多数磷酸化蛋白都有多个磷酸化位点，而且其磷酸化位点是可变的，所以对单一磷酸化蛋白质进行研究的传统方式，例如磷酸化抗体验证的方法显然不能满足磷酸化蛋白组的研究的多样性和复杂性，大分子生物质谱成为磷酸化蛋白鉴定最常用的技术手段。

 

如何查找质谱结果中的磷酸化位点？质谱结果最终以质荷比-离子强度质谱图的形式展现，相较于没有发生修饰的蛋白，磷酸化会导致特定序列分子量增加特定的值（+79.966），若在质谱检测过程中发现其中的部分肽段的分子量刚好增加了一个磷酸根的分子量，就假设这个肽段发生了磷酸化修饰，再通过二级质谱图进行二次确认。除去由于磷酸化蛋白往往丰度较低，对磷酸化蛋白组需要进行酶解后样品的富集之外，在质谱实验和后期数据分析也十分关键。串联质谱中，应该选择能够保证产生尽可能多的二级碎裂的对应母离子碎裂模式和方法，尽可能多地保留磷酸化基团在碎片离子上。在数据分析中，应该确定磷酸化肽的序列以及修饰位点，鉴定的假阳性率和可信度也是重要参考指标。

 

可以从质谱方法和分析软件这两个方面对磷酸化位点置信度进行分析。毫无疑问，提高磷酸化肽段的鉴定效率最有效的采用高分辨的串联质谱。另外，磷酸化肽的可信度和位点的鉴定可以通过增加二级碎片离子的数量来提高，所以采用多种互补的碎裂模式可以实现这一点。

 

百泰派克生物科技采用Thermo Fisher的Q ExactiveHF质谱平台，Orbitrap Fusion质谱平台，Orbitrap Fusion Lumos质谱平台结合Nano-LC，推出磷酸化定量蛋白组分析服务技术包裹。只需要将您的实验目的告诉我们并寄送样品，百泰派克生物科技负责项目后续，包括蛋白提取、蛋白酶切、磷酸化肽段富集、肽段分离、质谱分析、质谱原始数据分析、生物信息学分析所有事宜。

 

其他服务项目

 

优质检测平台

（1）基于生物化学、分子生物学、色谱的检测分析平台

该平台配备了Agilent 2100 生物分析仪、ProteinSimple凝胶成像系统、高效液相色谱系统，为蛋白质组学、代谢组学分析保驾护航，包括样品制备、分离纯化分子量测量、杂质表征表达研究等:

（2）基于质谱技术的蛋白质组学分析平台、代谢组学分析平台、蛋白测序平台

该平台配备了超高效液相色谱质谱联用，Orbitrap Fusion Lumos Tribri,Thermo Scientific Exploris以及氢气交换质谱仪配合机械臂为蛋白贡组学、代谢组学和蛋白测序提供了全面的分析手段，包括蛋白质和代谢物的分离、质谱分析、结构分析以及动态信息研究;

（3）生物药物表征平台

该平台配备了DSC-FTRR差示扫描量热仪与傅立叶变换拉曼光谱仪，氢气交换质谱仪配备机械臂，为生物药物表征提供了全面的分析手段，包括生物药物的分离、纯化、结构分析和动态信息研究:

（4）基于10x Genomics的单细胞分析平台

该平台能够完成基于10x Genomics单细胞分析平台的检测流程包括单细胞分选、cDNA合成、文库制备、文库质量检测、PCR扩增以及高通量测序;

（5）基于Fluidigm的单细胞质谱流式检测平台

采用基于Fluidigm Helios流式细胞仪(Mass Cytometry Systemfor Single Cell Analysis)用于单细胞质谱分析，该平台能够完成包括单细胞捕获、cDNA合成、实时定量PCR分析、目标区域扩增以及质谱流式细胞分析;

（6）基于高精度质谱的免疫多肽组学及免疫学检测平台

基于高精度质谱的免疫多肽组学及免疫学检测平台，能够完成包括多肽分离、纯化、合成、质谱分析、免疫学检测以及分子相互作用研究;

（7）生信云平台

基于生物信息分析方法的生信云平台，能够完成一整套的生物信息学解决方案，包括组学数据的质量分析、差异表达分析、差异表达物GO、KEGG、COG注释分析、聚类分析、相互作用网络等多层次网络和通路的分析。

 

百泰派克生物科技-生物制品表征，生物质谱多组学优质服务商

北京百泰派克生物科技有限公司(Beiing Bio-Tech Pack Technology Company Ltd.简称BTP)从事以生物质谱为依托的生物药物表征，大分子物质(包括蛋白质、多肽、代谢物)质谱分析以及小分子物质检测服务。

公司采用IS09001质量控制体系，zhuānyè提供以质谱为基础的CRO检测分析服务;

获国家CNAS实验室认可，为客户提供符合全球药政法规的药物质量研究服务;

业务范围覆盖蛋白质组学、多肽组学、代谢组学、生物药物表征、单细胞分析、单细胞质谱流式、生信云分析以及多组学生物质谱整合分析等;

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