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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
22
- 英文名:
CDC Anaerobic Agar
- 供应商:
上海西格
- 规格:
250g
| 产品名称 | CDC厌氧菌琼脂 | 货号 | XG-PYJ7215 |
| 英文名称 | CDC Anaerobic Agar | 产品规格 | 250g |
| 用途 | 仅供科研实验 | 货期 | 现货 |
添加剂:每瓶需配套添加6盒氯化血红素和6盒维生素K1使用。
用法:称取本品45.4g,加热溶解于1000ml蒸馏水中,分装每瓶200ml,121℃高压灭菌15分钟,冷至45-50℃时,每200ml培养基加入脱纤维羊血10ml、氯化血红素1ml(0.001g)和维生素K1 1ml(0.002g),混匀,倾入无菌平皿。
制备培养基的基本方法和注意事项:
1,配方的选定:同一种配方在不同著作中常会有某些差别。因此,除所用的是标准方法,应严格按其规定进行配制外,一般均应尽量收集有关资料,加以比较核对,再依据自己的使用目的,加以选用,记录其来源。 2,制备记录:每次制备均应有记录,包括名称,配方及其来源,和各种成份的牌号,最终ph值,消毒的温度和时间制备的日期和制备者等,记录应复制一份,原记录保存备查,复制记录随制好的一同存放,以防发生混乱。
3,成分的称取:各种成分必须精确称取并要注意防止错乱,最好一次完成,不要中断。可将配方置于傍侧,每称完一种成分即在配方面军做出记号,并将所需称取的药品一次取齐,置于左侧,每种称取完毕后,即移放于右侧。完全称取完毕后,还应进行一次检查。
4,各成份的混合和溶化:培养基所用化学药品均应是化学纯的。使用的蒸煮锅不得为铜锅或铁锅,以防有微量铜或铁混入其中,使细菌不易生长。最好使用不锈钢锅加热溶化,可放入大烧杯或大烧瓶中置高压蒸汽灭菌器或流动蒸汽消毒器中蒸煮溶化。在锅中溶化时,可先用温水加热并随时扰动,以防焦化,如发现有焦化现象,该培养基即不能使用,应重新制备。待大部分固体成分溶化后,再用较小火力使所有成分完全溶化,迄至煮沸。如为琼脂溶化,用另一部分水溶化其它成分,然后将两溶液充分混合。在加热溶化过程中,因蒸发而丢失的水分,最后必须加以补足。
培养基的使用步骤:
1.琼脂培养基的融化
将培养基放到沸水浴中或采用其他有相同效果的方法(如高压锅中的蒸汽)融化。经过高压灭菌的培养基尽量减少重新加热的时间,避免过度加热。培养基融化后立即移开,室温静置片刻(约2min),以免玻璃容器发生破裂。
融化后的培养基放入47℃~50℃恒温水浴锅中保温,冷却到47℃~50℃所需的时间取决于培养基的类型、体积和在水锅里的分装量。融化后内培养基应尽快使用,放置时间一般不超过4h。剩余的培养基固后不得再次融化使用。特 别是灵敏性培养基,应根据相关标准,缩短融化后放置的时间。
将琼脂培养基倒入类似检测培养使用的独立容器中,插入温度计,记录并保存琼脂的融化温度。
加入样品的培养基应将温度调节到44℃~47℃,或按照相关标准调节温度。
2.培养基的脱气
必要时,在使用前将养基放到沸水浴或蒸汽浴中加热15min,加热时松开容器盖子;加热后盖紧盖子,并迅速冷却至使用温度。
3.添加成分的加入
对热不稳定的添加成分应在培养基冷却至47℃~50℃时加入,灭菌的添加成分加入前应冷却至室温,避免冷的液体会造成琼脂凝胶或形成片状物。将添加成分慢加入培养基并充分混匀,尽快分装到待用的容器中。
4.培养基的弃置
所有污染和未使用的培养基的弃置应采用安全的方式,并符合相关法律法规的规定。
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250(g)
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文献和实验剂与生长刺激因子(血清、维生素K、氯化血红素、聚山梨酯-80等)。 (2)培养基的选择:初次培养一般都使用选择培养基和非选择培养基。 1)非选择培养基:本培养基使分离的厌氧菌不被抑制,几乎能培养出所有的厌氧菌。常使用心脑浸液琼脂(BHI)、布氏琼脂(BR)、胰豆胨肝粉琼脂(GAM)、胰胨酵母琼脂(EG)、CDC厌氧血琼脂等。 2)选择培养基:为有目的选择常见厌氧菌株,以便尽快确定厌氧的种类。 2.每份标本至少接种3个血平板,分别置于有氧,无氧及5%~10à2环境中培养
下 12000rpm 离心 15 min。收集蛋白上清,取少许裂解液用于后续检测各蛋白表达情况。剩余的裂解液加入 Anti-Cdc37,4℃ 缓慢摇晃孵育过夜。用适量裂解缓冲液预处理 ProteinA+G,20uL/管加入各抗体孵育过夜的细胞裂解液中,4℃ 缓慢摇晃孵育 2~4 h。免疫沉淀反应后,4℃,3000rpm,3 min,小心吸取上清,琼脂糖珠用 1 mL 裂解液冲洗 3-4 次,最后加入 15uL 2*SDS 上样缓冲液,100℃,5 min。Laemmli-SDS-PAGE电泳:电泳时根据情况
比菌体宽大,似鼓槌状,是本菌形态上的特征。繁殖体为革兰氏阳性,带上芽胞的菌体易转为革兰氏阴性。破伤风梭菌为专性厌氧菌,最适生长温度为37℃pH7.0~7.5,营养要求不高,在普通琼脂平板上培养24~48小时后,可形成直径1mm 以上不规则的菌落,中心紧密,周边疏松,似羽毛状菌落,易在培养基表面迁徒扩散。在血液琼脂平板上有明显溶血环,在疱肉培养基中培养,肉汤浑浊,肉渣部分被消化,微变黑,产生气体,生成甲基硫醇(有腐败臭味)及硫化氢。一般不发酵糖类,能液化明胶,产生硫化氢,形成吲哚,不能还原硝酸
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