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- BestBio贝博
- BB-41045
- 上海
- 2025年07月11日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
大量
- 供应商：
贝博
- 保存条件：
2-8℃
- 规格：
50T
贝博® BBcellProbe® 细胞周期检测试剂盒是利用细胞内DNA能够和荧光染料结合的特性，细胞各个时期其DNA含量不同从而结合的荧光染料不同，流式细胞仪检测的荧光强度也不一样来检测细胞周期。 细胞周期（cell cycle)是指细胞从前一次分裂结束起到下一次分裂结束为止的活动过程，通常由G0/G1期、S期、G2期和M期组成。G1期：细胞开始RNA和蛋白质的合成，但DNA含量仍保持二倍体。S期：DNA开始合成，这时细胞核内DNA的含量介于G1期和G2期之间。当DNA复制结束成为4倍体时，细胞进入G2期。G2期的细胞继续合成RNA及蛋白质，直到进入M期。因此，单纯从DNA含量无法区分G2期和M期。一旦有丝分裂发生，细胞分裂成两个细胞，这两个细胞或者进入下一个细胞周期，或者进入静止期（G0期），而G0期从DNA含量上同样无法与G1期区分。因此，整个复制周期可以描述为G0/G1、S、G2/M期。通过核酸染料PI标记DNA,并由流式细胞仪进行分析，可以得到细胞各个时期的分布状态，计算出G0/G1%、S%、G2/M%，了解增殖能力，在肿瘤病理学研究中，通常以S期细胞比率作为判断肿瘤增殖状态的指标。 本试剂盒中的BBcellProbe® NucGreen L1核酸荧光染料为绿色荧光的核酸染料，能选择性的嵌入核酸DNA双链螺旋的碱基之间与之结合，其结合的量与DNA的含量成正比例关系，用流式细胞仪进行分析，就可以得到细胞周期各个阶段的DNA分布状态，从而计算出各个期的百分含量。NucGreen L1染色后，假设G0/G1期细胞的荧光强度为1，那么含有双份基因组DNA的G2/M期细胞的荧 光强度的理论值为2，正在进行DNA复制的S期细胞的荧光强度为1-2之间。 常规细胞周期检测试剂盒采用PI染料，当细胞自身有红色荧光时，不能用PI进行细胞周期检测，贝博NucGreen L1适合用于细胞自带红色的细胞样本的周期检测。 除了本试剂盒提供的绿色荧光细胞周期检测产品，贝博还能提供红色、蓝色、橙色、深红色等荧光颜色的细胞周期检测试剂盒产品。
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文献和实验1.细胞处理需要小心操作,尽量避免人为的损伤细胞。
2.最好使用含EDTA的细胞消化液。
3.洗涤细胞离心转速不可超过800×g。
4.乙醇固定时离心大概采用2000×g力5分钟，离心力太小可能部分细胞难以沉淀。
5.固定时在振荡器上轻轻振荡细胞，并缓慢滴加75%乙醇，直接加入会导致细胞团聚的现象，很难重悬成单细胞。或者先用冷PBS悬浮细胞，充分悬浮，使细胞充分分散成单细胞。之后缓慢加入无水乙醇，终浓度为70-90%乙醇。乙醇固定之后须无细胞沉淀。
6.为防止不同批次细胞在实验时本身所出周期不同导致重复性差，可以在实验前进行细胞的同步化处理，减少批间差异。实验细胞应处于对数生长期，不能是完全长满，一般在50～80％比较好。
7.分析的时候需要的是单个的细胞，400目筛网过滤是用来将粘在一起的细胞团滤掉，否则会出现人为的多倍体干扰，不过如果经验丰富的操作人员也可以gate掉。如果没有条件过滤，请在染色之前将细胞弹的很散，再进行染色。
8.本试剂盒也可用于非固定细胞周期检测。
9.组织处理方法：用剪刀将组织剪成小块，用0.25%胰酶消化30min－1h，200－400目筛网过滤细胞，获得单细胞悬液。如组织难以消化，可加入适量胶原酶。
一、 GFP背景概述 绿色荧光蛋白（green fluorescent protein, GFP）最早由Osamu Shimomura于1962年在水母（Aequorea victoria）（图2a）中发现。这种蛋白质在蓝色波长范围的光照激发下发出绿色荧光，其发光过程需要冷光蛋白质Aequorin的帮助，而且，这个冷光蛋白质可与钙离子（Ca2+）相互作用（图3）。在Aequorea victoria中发现的野生型绿色荧光蛋白的分子量较小，仅为27~30kDa，而编码GFP的基因序列也很短
dmdfe 本人将GFP基因后面加了一段大约110bp的序列，插入PET28A的BamH1和Hind3位点，最后在BL21中表达。 经SDS-PAGE验证表明： 目的蛋白 大量存在菌体裂解后沉淀即包涵体中，但是该沉淀无色。 少量存在于上清中，上清显微弱的绿色。 看文献大量报道GFP融合蛋白几乎都形成可溶性表达，目的蛋白在上清中，并且诱导条件没有太大要求。 想请教一下各位做过GFP原核表达的经验
刚刚去BD网站，发现一个优惠活动，送BD绿色荧光蛋白表达载体，原价是6000千元的，赶快贴在这里，大家赶快去要呀，是个好东东！！ Free AcGFP green monomer vector while supplies last! Commemorative Promotion: Ten Years in Fluorescent Proteins Dear Researchers, Over the past ten years, your feedback
