- ￥600 - 3200
- 联祖
- LZ-PYJ4432
- 国产
- 2025年07月13日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
53
- 英文名：
Trypsin-EDTA solution
- 供应商：
上海联祖
- 规格：
100mL
英文名称：Trypsin-EDTA solution
产品规格：100mL
发货周期：1～3天
产品价格：询价
| 货号 | 规格 | 发货期 | 用途 |
| LZ-PYJ4432 | 100mL | 1～3天 | 仅供科研实验 |
胰蛋白酶(Trypsin)是由胰脏产生没有活性的胰蛋白酶原分泌到小肠后，小肠内的肠肽酶会活化该酶原，形成胰蛋白酶。胰蛋白酶的特点在于已经活化的胰蛋白酶，能够继续活化更多胰蛋白酶原，这种过程即自动催化。胰蛋白酶在小肠工作，它会将蛋白质水解为肽，进而分解为氨基酸，其最适温度约为37℃。
产品组分
胰蛋白酶-EDTA溶液(0.05%:0.02%，含酚红) 100mL
说明书 1份
保存：-20℃，有效期1年。
PBS、Hanks液或无血清培养液
显微镜
离心机
尽量减少反复冻融的次数，以免失效。
在使用Trypsin-EDTA solution过程中，要特别注意避免消化液被细菌污染。
Trypsin-EDTA solution消化细胞时间不宜过长，否则细胞铺板后生长状况会较差。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
贴壁细胞的消化
吸除培养液，用无菌PBS、Hanks液或无血清培养液洗涤细胞一次，以去除残余的血清。
加入少量胰蛋白酶-EDTA溶液，略盖过细胞即可，室温放置0.5～2min，不同的细胞消化时间有所不同。
显微镜下观察，细胞明显收缩，并且肉眼观察培养器皿底部发现细胞的形态发生明显的变化；或者用枪吹打细胞发现细胞刚好可以被吹打下来，吸除胰酶细胞消化液。加入含血清的完全细胞培养液，吹打下细胞，即可直接用于后续实验。
如果发现消化不足，则加入胰蛋白酶-EDTA溶液重新消化。
如果发现细胞消化时间过长，未及吹打细胞，细胞已经有部分直接从培养器皿底部脱落，直接用胰酶细胞培养液把细胞全部吹打下来。1000～2000g离心1min，沉淀细胞，尽量去除胰酶细胞消化液后，加入含血清的完全培养液重新悬浮细胞，即可用于后续实验。
组织的消化
不同的组织需要消化的时间相差很大，通常以消化后可以充分打散组织为宜。
培养基的计数方法：
一、稀释涂布平板法（亦称活菌计数法）是一种常用的微生物计数方法，其原理是当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落来源于样品稀释液中的一个活菌。通过统计平板上的菌落数，可以推测出样品中大约含有多少活菌。这种方法操作简便，适用于菌体大小和质量都相近的类群，如细菌、酵母菌等的计数。计算公式为每克样品中的菌株数=C/V*M，其中C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V代表涂布平板时所用的稀释液的体积(mL)，M代表稀释倍数。
二、显微镜直接计数法利用特定细菌计数板或血细胞计数板，在显微镜下计算一定容积的样品中微生物数量。这种方法不能区分死菌与活菌，但可以估算出1mL培养中液中细胞个数，计算公式为1mL 培养中液中细胞个数=小方格中细胞平均数×400 ×104×稀释倍数(个/mL)。显微镜直接计数法的缺点是不能区分死菌与活菌，因此计数到的细胞数包括了死亡的细胞数。
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培养基操作步骤：
一、用法：称取本品33.0g，加热溶解于1000ml蒸馏水中，分装三角瓶，121℃高压灭菌15分钟，备用。
二、配料：首先，根据培养基的配方，准确称量各种成分，包括粉状和非粉状的成分，如肉膏等，放入烧杯中。
三、溶化：向烧杯中加入适量的水，然后搅拌以溶解各成分。对于含有琼脂的培养基，应注意防止外溢，并在溶化过程中保持搅拌。
四、矫正pH：在培养基溶解均匀并冷却至室温后，使用pH试纸测量pH值，然后根据需要加入酸或碱来调整至合适的pH值。
五、澄清过滤：使用滤纸或多层纱布对培养基进行过滤，以去除杂质。
六、分装：将制备好的培养基分装入试管内或三角瓶内，确保管（瓶）口塞上棉塞，以防止外界微生物污染。
七、灭菌：对分装好的培养基进行灭菌处理，通常是通过高压灭菌来确保无菌环境。
八、检定：灭菌后的培养基可以进行质量检定，以确保其符合使用要求。
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文献和实验问：请问哪位仁兄能告知一下EDTA-胰蛋白酶的配制。急用！多谢！答：1、胰酶是0.25%,这是质量体积比，就是说0.25g胰酶溶于100ml PBS,注意，尽量不要用水来溶，因为要保持渗透压。2、EDTA的工作液溶度是0.02%－0.1%，根据细胞消化的难易程度自己调整。EDTA并不是必须的，容易消化的细胞可不加。EDTA对细胞贴壁性有影响，因此使用时要甚重。如果影响贴壁，但消化时必须要用，那么在用完全培养基终止消化后，可离心弃上清，再加完全培养基培养，可去除EDTA。如果对贴壁没
干净； 将组织置于平皿中，用眼科剪刀剪成小颗粒（1~2 mm3）； 加入 30 倍组织量的蛋白酶溶液（0.1% 胰蛋白酶和 0.02%EDTA 等比混合）； 移液管转至三角烧瓶，置于37℃水浴或者恒温箱中消化 20~60 min，每隔5~10 min震荡一次。若需消化较长时间，可每隔 15 min 将 2/3 的消化上清液转移到离心管中冰浴或离心去除消化液，加入含血清培养基终止消化，另补充新的消化液至三角烧瓶中继续消化； 将消化液或分批收集的细胞悬液经 200~300 目的滤网过滤，300 g
，在0.1毫升细胞悬液中加0.1毫升0.4%的台盼兰溶液。轻轻混匀，数分钟后，用血球计数板计数细胞。活细胞排斥台盼兰，因而染成蓝色细胞是死细胞。 34. 培养基中丙酮酸钠的作用是什么？ 丙酮酸钠可以作为细胞培养中的替代碳源，尽管细胞更倾向于以葡萄糖作为碳源，但是，如果没有葡萄糖的话，细胞也可以代谢丙酮酸钠。 35. 二价离子抑制胰蛋白酶活性吗？使用胰蛋白酶时加入EDTA的目的是什么？ 二价离子的确抑制胰蛋白酶活性。EDTA用来螯合游离的镁离子和钙离子
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