快速内切酶SmaI，EnzymoPure™，阿拉丁

克隆启动子的方法

1.1　利用启动子探针载体筛选启动子启动子探针型载体是一种有效、经济、快速分离基因启动子的工具型载体，包含2个基本部分：转化单元和检测单元。其中，转化单元含复制起点和抗生素抗性基因，用于选择被转化的细胞；检测单元则包括1个已失去转录功能且易于检测的遗传标记基因以及克隆位点。利用启动子探针载体筛选启动子的过程为，先选用1种适当的限制性核酸内切酶消化切割染色体DNA，然后将切割产生的DNA限制片段群体与无启动子的探针质粒载体重组，并按照设计的要求使克隆的片段恰好插在紧邻报告基因的上游位置；随后再把重组混合

体内体外表达――Promega

(发音为ten a)的蛋白水解位点，使得纯化标签可从天然蛋白上分离。载体还带有方便得多克隆区域，便于构建融合蛋白。整个表达系统不过4000人民币，已经包含载体菌株检测试剂纯化柱和洗脱试剂等等，一如Promega产品的实惠价格。多系统表达，东边不亮西边亮Flexi® 载体系统是一种用于定向克隆蛋白编码序列的、简单而功能强大的方法。它是以两种稀有的限制性内切酶：Sgf I 和 Pme I为基础。这两种酶在我们试验常用到的物种：人、大鼠、小鼠、线虫等中出现频率都非常小，一般情况都在5%一下。该系统提供快速

mRNA富集还是rRNA去除

并被共同捕获出来。 Poly(A) 富集是一种非常经济高效且快速的预处理方法，可以选择主要编码蛋白质的 mRNA。它可用于所有具有 poly(A) 尾 RNA 的物种（真核生物），以去除不需要的 rRNA 并将测序数据集中在 mRNA 上。 然而，poly(A) 富集有两个主要缺点： ➊首先，它只能用于具有poly(A)-尾RNAs的物种。因此，它仅限于真核生物，不能用于原核生物。然而，真核生物也拥有我们感兴趣的缺少 poly(A) 尾的转录本。它们在 poly(A) 选择过程中