快速内切酶NotI，EnzymoPure™，阿拉丁

体内体外表达――Promega

(发音为ten a)的蛋白水解位点，使得纯化标签可从天然蛋白上分离。载体还带有方便得多克隆区域，便于构建融合蛋白。整个表达系统不过4000人民币，已经包含载体菌株检测试剂纯化柱和洗脱试剂等等，一如Promega产品的实惠价格。多系统表达，东边不亮西边亮Flexi® 载体系统是一种用于定向克隆蛋白编码序列的、简单而功能强大的方法。它是以两种稀有的限制性内切酶：Sgf I 和 Pme I为基础。这两种酶在我们试验常用到的物种：人、大鼠、小鼠、线虫等中出现频率都非常小，一般情况都在5%一下。该系统提供快速

mRNA富集还是rRNA去除

并被共同捕获出来。 Poly(A) 富集是一种非常经济高效且快速的预处理方法，可以选择主要编码蛋白质的 mRNA。它可用于所有具有 poly(A) 尾 RNA 的物种（真核生物），以去除不需要的 rRNA 并将测序数据集中在 mRNA 上。 然而，poly(A) 富集有两个主要缺点： ➊首先，它只能用于具有poly(A)-尾RNAs的物种。因此，它仅限于真核生物，不能用于原核生物。然而，真核生物也拥有我们感兴趣的缺少 poly(A) 尾的转录本。它们在 poly(A) 选择过程中

PCR产物克隆方法

序列外，还需要在其5'端多合成3-4个碱基以利于限制性内切酶与PCR产物末端的稳定结合。即使如此，其酶切效率也不够高。其中尤以NotI、XhoI和XbaI等较为难切。采用突变PCR方法可克服上述缺点。该方法是通过在两PCR引物序列中改变1至数个核苷酸创造出一个限制性内切酶位点。鉴于PCR引物的3'末端序列的互补性是PCR成功的关键，在PCR引物的中部或近5'端改变1个或几个碱基对PCR扩增效果影响不大。这种方法不需要增加PCR引物的长度，而且酶切效果优于5'加端法。对于特定DNA片段的克隆，此方法