磁珠法粪便DNA提取试剂盒

特别提示：包括磁珠法粪便DNA提取试剂盒在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：磁珠法粪便DNA提取试剂盒
英文名称：Stool DNA Kit
产品货号：CZ004
产品规格：20次/100次

产品简介：
本产品适用于从粪便样品中快速、高效地提取人及肠道菌群基因组DNA。提取过程采用超顺磁性微球；使用预制的缓冲液，可直接进行提取，且可根据加入的样本量来调整反应体系。本产品既可以手动进行少量样品的提取，也适合于用自动化工作站进行高通量操作。提取的产物可用于酶切、PCR扩增、检测等后续实验。
操作流程：
首次使用前：
● 在Washing Buffer B中加入指定量(见瓶身标签)的*丙醇(分析纯)，混匀后于室温下密闭保存。
● 在Washing Buffer C中加入指定量(见瓶身标签)的无水乙醇(分析纯)，混匀后于室温下密闭保
● 在Proteinase K干粉中加入指定量(见管身标签)的Solution A，混匀后保存于2～8℃，或分装后保存于-20℃。
准备物品：
● 1.5 mL离心管：2个/样品
● 2mL离心管：1个/样品
● 单通道移液器：20 μL、200 μL、1000 μL
● 漩涡振荡器
● 恒温金属浴(或水浴锅)：70℃/55℃
● 磁性分离器：可选用百奥莱博磁性分离器
操作步骤(以200mg粪便样本为例，1g样本请参见下表1)：
一、手工法提取步骤
1.样本采集
(1)用刀片切取180mg～220mg粪便样本到2mL离心管中。
2.裂解
(1)在上述2mL离心管中加入600 μL的Lysis Buffer(用前65℃水浴5～10min)，再加入20 μL的Proteinase K(检查是否已加入Solution A)，调整合适的转速漩涡振荡1min，使其充分混合，再将离心管置于70℃加热20 min，90℃加热10 min，期间震荡混匀三次。
(2)13000rpm离心3min，取300μL上清至一个新的1.5mL EP管中。(若为1g粪便样本体系，取上清1.5mL至新的15mL EP管中)
3.结合
在上述1.5mL离心管中加入300μL Binding Buffer，200μL*丙醇，20μL Magnetic beads，震荡混匀30s，室温结合5min，期间颠倒混匀两次，将离心管置于磁性分离器上直至溶液澄清，用移液器移去上清液并取下离心管。
注：此步骤磁性分离时间应不少于2 min。
4.洗涤
(1)加入800 μL Washing Buffer A，震荡混匀30s，室温下静置1 min，期间上下颠倒混匀一次，将离心管置于磁性分离器上直至溶液澄清，用移液器移去上清液并取下离心管。
(2)加入800 μL Washing Buffer B(检查是否已加入*丙醇)，震荡混匀30s，室温下静置1 min，期间上下颠倒混匀一次，将离心管置于磁性分离器上直至溶液澄清，用移液器移去上清液并取下离心管。
(3)加入800 μL Washing Buffer C(检查是否已加入无水乙醇)，震荡混匀30s，室温下静置1 min，期间上下颠倒混匀一次，将离心管置于磁性分离器上直至溶液澄清，用移液器移去上清液并取下离心管。
(4)重复步骤(3)一次(若为1g粪便样本体系，该步仅加入1mL Washing Buffer C，震动混匀后转移至1.5mL EP管中)。
注：步骤(4)应尽量除尽洗涤液。
5.干燥
保持离心管于磁力架上，将其置于超净工作台中风干至磁珠表面无明显光泽(5～7 min)。
6.洗脱
加入50 μL 65℃预热的 Elution Buffer，震荡混匀30s，于65℃加热5 min后，将离心管置于磁性分离器上直至溶液澄清，转移上清液至新的1.5mL离心管中，此即为纯化得到的基因组DNA，可保存于-20℃。
二、自动化仪器(磁棒法)提取
1. 磁珠法自动化提取准备工作
1.1本试剂盒适合配备TIANLONG -NP968磁珠核酸提取仪进行病毒DNA提取工作。
1.2在96孔深孔板中第1列和第7列依次加入300μL Binding Buffer，200μL *丙醇，20μL Magnetic beads和300μL样本。
1.3在96孔深孔板中第2列和第8列加入800μL Washing Buffer A。
1.4在96孔深孔板中第3列和第9列加入800μL Washing Buffer B(检查是否已经加入*丙醇)。
1.5在96孔深孔板中第4列和第10列加入800μL Washing Buffer C(检查是否已经加入无水乙醇)。
1.6在96孔深孔板中第5列和第11列加入800μL Washing Buffer C(检查是否已经加入无水乙醇)。
1.7在96孔深孔板中第6列和第12列加入70μL Elution Buffer 。
注：TIANLONG -NP968磁珠核酸提取仪zuì低洗脱液不能低于60μL，因此将试剂盒中50μL 洗脱液增加至70μL洗脱。
2. 自动化仪器提取步骤
注意事项:
1.操作之前，请务必认真阅读本产品手册。
2.提取效果与粪便样本质量有关。
3.蛋白酶K干粉溶解后，可分装储存于-20℃，但应避免反复冻融。
4.应避免对磁珠进行冷冻、离心等操作。
5.磁珠取用前应充分重悬均匀。
6.磁珠干燥前，应用移液器吸尽洗涤液。
7.应避免磁珠过度干燥，否则会严重降低核酸洗脱效率。
8.建议使用质量较好的离心管和移液器吸头，避免因粘附磁珠而造成损失。

除了磁珠法粪便DNA提取试剂盒,，我公司还供应以下相关产品：



名称：特异性显色基质鲎试剂盒
货号：BTN170401
规格：32次
鲎试剂为鲎科动物东方鲎的血液变形细胞溶解物的冷冻干燥品，鲎试剂中含有C因子、B因子、凝固酶原、凝固蛋白原等。在适宜的条件下(温度，pH值及无干扰物质)，细菌内毒素激活C 因子，引起一系列酶促反应，激活凝固酶原形成凝固酶，凝固酶分解人工合成的显色基质，使其分解为多肽和黄色的对硝基*胺(pNA，λmax=405nm)。在一定时间内，pNA的生成量与细菌内毒素浓度成正相关，据此，可以定量样品的内毒素浓度。同时，对硝基*胺(pNA)也可用偶氮化试剂染成玫瑰红色(λmax = 545nm)，避免了样品本身的颜色对405nm处吸收峰的干扰。特异性鲎试剂是在鲎试剂的配方中添加G因子旁路抑制剂，使鲎试剂对(1,3)β-D-葡聚糖产生假阳性反应，使检测结果更加准确可靠。本鲎试剂对细菌内毒素的反应是特异的，抗干扰能力比普通鲎试剂更强，使用时只需用细菌内毒素检查用水直接溶解即可，不需另外添加G因子抑制剂(抗增液)。

试剂盒特点：
1. 仅用于体外细菌内毒素的定量检测，严禁试剂以任何途径进入机体。
2. 接触试剂及样品的所有器皿必须是除热原的。实验过程应防止微生物的污染。该说明书中的除热原指内毒素浓度小于0.005 EU/ml。玻璃器皿可经250℃干烤至少60分钟去除热原。
3. 待测样品的pH值应在6.0–8.0之间，若超出此范围，需用除热原的缓冲液、0.1M氢氧化*或0.1M 盐酸调节。
4. 当样品中可能存在鲎实验的干扰物质时，须进行干扰实验。

试剂盒组成：

成分	规格
细菌内毒素标准品	2支
特异性鲎试剂	2 支×1.7mL
显色基质	2 支×1.7mL
偶氮化试剂1	2 支×10mL
偶氮化试剂2	2 支×10mL
偶氮化试剂3	2 支×10mL
HCl(反应终止剂)	50ml
细菌内毒素检查用水	50mL×2 瓶
除热原试管，10×75mm	10×5 支
除热原吸头，1000VL	10×4 支
除热原吸头，200VL	1盒

储存条件：常温运输，4℃避光保存，有效期两年。