- ￥387.90
- 阿拉丁
- 上海
- D669986
- 2025年07月15日
企业认证
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- 详细信息
- 询价记录
- 技术资料
- 保存条件：
室温;-20°C储存;避免反复冻融
- 英文名：
DNALyse Amplification Kit
- 库存：
期货
- 供应商：
上海阿拉丁生化科技股份有限公司
- 规格：
D669986-50T
产品内容
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产品简介
本试剂盒采用独特的缓冲体系，包含了快速制备基因组DNA和PCR扩增的所有试 剂，适用于从各种动植物组织、细菌中一步提取基因组DNA并用于PCR扩增。整个提 取过程无需液氮研磨，无需有机溶剂抽提，无需无水乙醇沉淀，提取的DNA质量稳定。 本试剂盒提供的2×PCR MasterMix是一种兼容性强的PCR试剂，能够高效特异扩增DNA样品，该试剂包括DNA聚合酶、dNTPs、MgCl2、反应缓冲液、PCR反应增强剂等。具有快速简便、灵敏度高、特异性强、稳定性好等特点，特别适合于高通量的筛选。
实验前的准备及重要注意事项
1. 向Proteinase K中加入指定用量的Proteinase K Storage Buffer使其溶解，-20℃保存。配制好的Proteinase K勿长时间室温放置，避免反复冻融，以免影响其活性。
1. 样品应避免反复冻融，否则会导致提取的DNA片段较小且提取量也下降。 2. 使用前请检查Buffer SA是否出现结晶或沉淀，如有结晶或沉淀出现，请将Buffer SA于56℃水浴重新溶解。 3. 本产品提供的PCR MasterMix为2×，使用时需加入模板和引物，并加入RNase-Free Water补足体积，使其浓度为1×即可进行反应。 操作步骤1. 取材： 植物材料：取约10 mg样本于离心管（自备）中； 动物材料：取约10 mg样本于离心管（自备）中； 细菌：取生长状态良好的菌液200-800 μL于离心管（自备）中，收集菌体。 2. 加入200 μL Buffer SA，涡旋混匀。 注意：如果是植物叶片和动物组织，应尽量用研磨杵研磨：如果是植物种子，应事先破碎并研细； 细菌、1-3mm鼠尾样本可直接涡旋裂解。 3.加入10 μL Proteinase K，混匀，56℃孵育10分钟，95℃处理5分钟。 注意：1）如果为动物组织样本，可适当延长56℃孵育时间至30分钟；如有未完全消化的任何组织， 应在下一步离心后尽量彻底去除。 2）95℃处理时注意不要超过5分钟。 4．13,000 rpm（~17,900×g），离心5分钟。 5. 转移上清至新的离心管（自备）中，直接用于PCR扩增，或4℃或-20℃保存溶液。 6. PCR扩增： 1）PCR反应体系： 以下举例为常规PCR反应体系和反应条件，实际操作中应根据模板、引物结构和目的片段大小不同进行相应的改进和优化。
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注意：引物浓度请以终浓度0.2-0.6μM作为设定范围的参考。扩增效率不高的情况下，可提高引物的浓度；发生非特异性反应时，可降低引物浓度，由此优化反应体系。
2）PCR反应条件：
注意：1）一般实验中退火温度比扩增引物的熔解温度Tm低5℃，退火时间一般为30-60秒，无法得到 理想的扩增效率时，适当降低退火温度；发生非特异性反应时，提高退火温度，由此优化反应条件。
2）延伸时间根据所扩增的片段大小设定，本产品中所包含的Taq DNA Polymerase的扩增效率为1kb/30s 。
3）可根据扩增产物的下游应用设定循环数。循环次数太少，扩增量不足；循环次数多，错配机率会增加，非特异性背景严重。所以，在保证产物得率的前提下，应尽量减少循环次数。
3）结果检测：反应结束后取5 µL反应产物，直接进行琼脂糖凝胶电泳检测。
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