粪便基因组DNA提取试剂盒，50 preps，阿拉丁

产品内容：

产品简介 

本试剂盒适用于从粪便样本中提取总DNA，包括样本中的细胞、细菌、寄生虫以及 病毒的总DNA，也适用于含有高浓度PCR反应抑制剂的样本。本品可处理多至300 mg 的粪便样本，纯化获得主要为20-30 kb的DNA片段，纯化过程中不需苯酚或氯仿等有 毒溶剂，无需乙醇沉淀，可在一小时内获得高纯度的DNA。本试剂盒采用独特的缓冲系 统使裂解液中的DNA高效结合到吸附柱上，同时粪便中的蛋白杂质及抑制下游反应的其 他有机化合物可流过膜，PCR和酶反应的抑制剂以及残留的杂质可通过两步洗涤步骤有 效去除，最后使用低盐缓冲液或水洗脱，即可获得高纯度DNA。纯化得到的DNA可以 直接用于酶切、PCR、Real-Time PCR、文库构建、Southern Blot、分子标记等下游实验.

实验前准备及重要注意事项 

1．样品应避免反复冻融，否则会导致提取的DNA 片段较小且提取量下降。 

2．第一次使用前应按照试剂瓶标签的说明预先在Buffer GW1和GW2中加入无水乙醇。 

3．使用前请检查Buffer SL和Buffer GL是否出现结晶或者沉淀，如有结晶或者沉淀，请 将Buffer SL和Buffer GL于56℃水浴重新溶解。 

4．如果下游实验对RNA污染比较敏感，可以在加入Buffer SL后加入4 μl DNase-Free 的RNase A (100 mg/ml)。

操作步骤 

1．取100-300 mg粪便样本，置于离心管（自备）中。 

2．加入1 ml Buffer SW，涡旋振荡3-5分钟，使样本均匀分散于溶液中。12,000 rpm （~13,400×g）离心1分钟，弃上清。 

3．加入1 ml Buffer SL，涡旋振荡3-5分钟，使样本均匀分散于溶液中，65℃水浴20分 钟，期间可每隔5分钟涡旋振荡15秒。 注意：如需去除RNA，可在上述步骤完成后，加入4 μl浓度为100 mg/ml的RNase A溶液（货号： CW0601S），震荡混匀，室温放置5-10分钟。 

4．12,000 rpm离心3分钟，将上清移至新的离心管（自备）中。 

5．向上清液中加等体积Buffer GL，颠倒混匀15-25次，冰上放置5分钟。12,000 rpm 离心5分钟。 注意: 此时液体可能为透明或浑浊状态，均不影响实验。 6．将步骤5中所得上清加入到已装入收集管的吸附柱（Spin Columns DM）中，若一次 不能加完溶液，可分多次转入。12,000 rpm（～13,400×g）离心1分钟，倒掉收集 管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。 

7．向吸附柱中加入500 μl Buffer GW1（使用前检查是否已加入无水乙醇），12,000 rpm 离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。 8．重复步骤7。 

9．向吸附柱中加入500 μl Buffer GW2（使用前检查是否已加入无水乙醇），12,000 rpm 离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。 10.12,000 rpm离心2分钟，倒掉收集管中的废液。将吸附柱置于室温数分钟，以彻底 晾干。 注意：这一步的目的是将吸附柱中残余的乙醇去除，乙醇的残留会影响后续的酶促反应（酶切、 PCR 等）。 

11.将吸附柱置于一个新的离心管（自备）中，向吸附柱的中间部位悬空滴加50-100 μl Buffer GE或灭菌水，室温放置2-5分钟，12,000 rpm离心1分钟，收集DNA溶液，-20℃保存DNA。 

注意：1）如果下游实验对pH值或EDTA敏感，可以用灭菌水洗脱。洗脱液的pH值对洗脱效率有很 大影响，若用水做洗脱液应保证其pH值在7.0-8.5（可以用NaOH将水的pH值调到此范围），pH值 低于7.0时会降低洗脱效率。 

2）离心之前室温孵育5分钟可以增加产量。

3）用另外的50-100 μl Buffer GE或灭菌水再次洗脱可以增加产量。 

4）如果要提高DNA的终浓度，可以将步骤11所得的DNA洗脱液重新加至吸附膜上，重复步骤11； 可以增加DNA的终浓度，但可能会减少总产量。如果DNA的量小于1 μg，推荐用50 μl Buffer GE或 灭菌水洗脱。 

5）保存在水中的DNA会受到酸性水解作用的影响，如需长期保存，推荐用Buffer GE洗脱并于-20℃ 保存。 

6）基因组DNA模板中残余的微量PCR抑制物可能对PCR反应产生不良影响，可将DNA稀释2-10倍 通常即可解决