Saliva Genomic DNA Kit，阿拉丁

产品内容

产品简介

本试剂盒适合于从新鲜唾液或唾液/保存液混合液中提取基因组DNA。本产品纯化过程不需使用苯酚或氯仿等有毒溶剂，无需乙醇沉淀。优化的缓冲体系使DNA异地结合到硅基质离心吸附柱上，PCR和其他酶促反应的抑制剂可通过两步洗涤步骤被有效去除，最后使用低盐缓冲液或水洗脱，即可得到高纯度DNA。纯化得到的可以直接用于酶切、PCR、Real-Time PCR、文库构建、Southern Blot、分子标记等下游实验。

自备试剂：无水乙醇

实验前准备及重要注意事项

1. 样品应避免反复冻融，否则会导致提取的DNA片段较小且提取量下降。

2. 第一次使用前应按照试剂瓶标签的说明在Buffer GW1和Buffer GW2中加入无水乙醇。

3. 使用前请检查Buffer GL是否出现结晶或者沉淀，如有结晶或者沉淀，请将Buffer GL于56℃水浴重新溶解。

4. 如果下游实验对RNA污染比较敏感，可以在第3步中加入4 μL DNase-Free的RNase A（100 mg/mL）。

5. 若要在室温下长时间保存唾液DNA。

操作步骤

1. 加入唾液样本或唾液/保存液混合液400μL 。

注意：1）加入保存液的唾液混合物需在提取前50℃水浴1小时或50℃空气温箱2小时。             

2）如需要增加样本体积，则倍比增加步骤2-4中的Proteinase  K、Buffer  GL和无水乙醇的体积，步骤5中液体可分多次转入。

2. 加入40 μL Proteinase K。

3. 加入400 μL Buffer GL，涡旋震荡充分混匀，56℃水浴15-30分钟。

注意：如需去除RNA，可在上述步骤完成后，加入4μL浓度为100mg/mL的RNase A溶液，涡旋15秒，室温放置2分钟。

4. 短暂离心以去除管盖内壁的水珠。加入400μL无水乙醇，涡旋震荡充分混匀。短暂离心。

注意： 1) 加入Buffer GL和无水乙醇后要立即涡旋震荡混匀。

2) 加入Buffer GL和无水乙醇后可能会产生白色沉淀，不会影响后续实验。

3) GL和无水乙醇后可能形成溶胶状产物，此时推荐进行剧烈震荡或涡旋处理。

5. 上一个步骤中所得溶液全部加入到已装入收集管（Collection Tube）的吸附柱（Spin Column DM）中，若一次不能加完溶液，可分多次转入。12,000 rpm（～ 13,400 ×g）离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。

6. 向吸附柱中加入500 μL Buffer GW1（使用前检查是否已加入无水乙醇），12,000 rpm 离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。

7. 向吸附柱中加入500 μL Buffer GW2（使用前检查是否已加入无水乙醇），12,000 rpm 离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。

注意：如需进一步提高DNA纯度，可重复步骤7。

8. 12,000 rpm离心2分钟，倒掉收集管中废液。将吸附柱置于室温数分钟，以彻底晾干。

注意：这一步的目的是将吸附柱中残余的乙醇去除，乙醇的残留会影响后续的酶促反应（酶切、PCR等）。

9. 将吸附柱置于一个新的离心管（自备）中，向吸附柱的中间部位悬空加入50-200 μL Buffer GE或灭菌水，室温放置2-5分钟，12,000 rpm离心1分钟，收集DNA溶液，-20℃保存DNA。

注意：  1）如果下游实验对pH值或EDTA敏感，可以用灭菌水洗脱。洗脱液的pH值对洗脱效率有很大影响，若用水做洗脱液应保证其pH值在7.0-8.5（可以用NaOH将水的pH值调到此范围），pH值低    于7.0时洗脱效率不高。

2） Buffer GE在65-70℃水浴预热，离心之前室温孵育5分钟可以增加产量。

3） 因为保存在水中的DNA会受到酸性水解作用的影响，如需长期保存，推荐用Buffer GE洗脱并于-20℃保存。