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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
100
- 英文名:
StarLighter HP SYBR Green qPCR Mix (Universal)
- CAS号:
-
- 保质期:
-
- 供应商:
启衡星
- 保存条件:
-
- 规格:
5 ml,4*1.25ml/盒/1 ml,1支/盒
| 规格: | 5 ml,4*1.25ml/盒 | 产品价格: | ¥1000.0 |
|---|---|---|---|
| 规格: | 1 ml,1支/盒 | 产品价格: | ¥250.0 |
产品简述:
启衡星 SYBR Green qPCR Mix 是一款含基因工程酶的 qPCR 试剂。该基因工程酶耐受高浓度的 SYBR Green I 染料,反应体系中加入足够多的SYBR Green I 染料,能够降低荧光信号达到阈值所需的循环数(Ct 值),提高信噪比、线性范围和灵敏度。启衡星 SYBR Green qPCR Mix 扩增特异性强,能有效减少非特异性扩增,数据结果更加可靠。产品能有效扩增复杂模板,如高 GC ,高 AT含量的目的片段,同时抗抑制剂干扰能力强。新一款 HP SYBR qPCR Mix与之前的版本具有同等性能!
应用方向:
基因表达分析
RNA病毒检测
低拷贝基因检测
基因表达验证
病毒及病原菌等检测
产品优势:
扩增特异性强,数据结果可靠
扩增效率高,Ct 值提前
信噪比高,灵敏度高
高 GC 或高 AT 的片段扩增效果好
耐受抑制剂能力强
优异表现:
1、扩增特异性强,性能表现优异


Fig1 不同试剂的qPCR 结果准确性比较。以人的cDNA为模板,使用同厂家试剂,扩增长度为219 bp 的片段,GC%=64% (TR 基因)。分别得到启衡星 SYBR Green qPCR Mix 与各品牌的扩增和熔解曲线图;SL—启衡星 SYBR Green qPCR Mix,得到非常完美的扩增曲线,荧光信号强,熔解曲线及电泳条带单一 、准确。
2、扩增效率高,线性范围好,低拷贝检测灵敏度高
Fig2 不同试剂对连续梯度稀释模板的定量结果比较。以KAPA Ion Torrent Library Quantification Kit中浓度为8.3pM的标准品作为S1,依次5倍稀释得到(S2-S10)为模板,分别用启衡星SYBR Green qPCR Mix与供应商 KP 进行qPCR定量获得的扩增曲线及熔解图。启衡星SYBR Green qPCR Mix,从S1-S10扩增效率(Eff=100.483%)好,扩增曲线完美,荧光信号强,熔解曲线单一。
3、荧光信号强,灵敏度高
Fig3 不同试剂扩增曲线的荧光强度比较。使用同样模板和引物, 使用市面上各品牌的qPCR 试剂得到扩增曲线图,上图为去掉ROX 后的各品牌的荧光信号值比较,供应商KP 与启衡星 SYBR Green qPCR Mix荧光信号强度更高。
4、Ct 值出现更早

Fig4 不同试剂qPCR 结果的Ct 值比较。以人DNA 为模板,使用不同厂家试剂,扩增长度为219 bp 的片段,GC%=64% (TR 基因); 在产物 经电泳验证为目的片段的前提下,扩增曲线去掉ROX 校正后,启衡星 SYBR Green qPCR Mix Ct 值更小,灵敏度更高。
5、高GC或高AT的片段扩增效果好

Fig5 不同试剂定量高AT 片段的结果比较。以人的DNA 为模板,使用不同厂家试剂,扩增长度为198 bp 的片段,AT%=64.4% (hPRTl 基 因);从扩增效率上看,启衡星 SYBR Green qPCR Mix,Eff=l00.868%为更优;供应商TY3,Eff=94.630%;供应商KP,Eff=98.334%。

Fig6 不同试剂定量高GC 片段的结果比较。以人的DNA 为模板,使用不同厂家试剂,扩增长度为322 bp 的片段,GC%=75.5% (ApoE 基 因);从扩增效率上看,启衡星 SYBR Green qPCR Mix,Eff=101.307%为更优;供应商TY3,Eff=150.097%;供应商AB,Eff= NA(更高浓度无扩增)。
6、耐受抑制剂能力强

Fig7 不同试剂定量含抑制剂模板的结果比较。以人的DNA 为模板,使用不同厂家试剂,扩增长度为393bp 的片段,GC%=35.6% (F8-exon 10 基因);以天根磁珠法血液基因组提取试剂盒提取的DNA 为模板,原始模板浓度为100ng/µL,作为S1,之后依次使用同样稀释液按梯度稀释10倍分别得到S2、S3、S4。从扩增效率看,启衡星SYBR Green qPCR Mix,Eff=94.365% 为更优;供应商KP,Eff=NA(更高浓度无扩增)。启衡星 SYBR Green qPCR Mix 扩增效率符合要求,供应商KP 的S1模板未扩增。
7、稳定性好
4℃保存稳定性

Fig8A
常温与37℃保存稳定性

Fig8B

Fig8C
Figure8. 启衡星 SYBR Green qPCR Mix稳定性测试的结果展示。图A:试剂4℃保存至39天;图B:试剂室温保存至8天(左图);试剂37℃ 保存至8天(右图);图C:试剂反复冻融至35次;以人的DNA为模板,扩增长度为123bp的片段(UBC基因),GC%=52%,未见明显信号强度降低和Ct 值延迟。
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文献和实验1.Antioxidative and antibacterial gallium (III)-phenolic coating for enhanced osseointegration of titanium implants via pro-osteogenesis and inhibiting osteoclastogenesis
2.In silico genome-wide analysis of homeodomain-leucine zipper transcription factors in Cannabis sativa L
成功做完了逆转录,这时候可能有些疲累了。筛引物、做定量的时候要加样的孔也较多,即使使用了 qPCR 预混液,也有加错样的可能发生。诺唯赞的 ChamQTM SYBR® Color qPCR Master Mix 系列(Q411 /Q421 /Q431 /Q441)提供不同颜色的试剂,利用移液过程中的变色效应,追踪移液过程,可以极大的减少移液错误。 引物设计有原则 在使用 SYBR 染料法时,引物设计需遵循以下原则:引物长度 18~25bp,产物长度 80~300bp,GC 含量 40~60
一般来讲,进行real-time qPCR MasterMix都是2×的浓缩液,只需要加入模板和引物就可以。由于real-time qPCR灵敏度高,所以每个样品至少要做3个平行孔,以防在后面的数据分析中,由于Ct相差较多或者SD太大,无法进行统计分析。通常来讲,反应体系的引物终浓度为100-400mM;模板如果是总RNA一般是10ng-500,如果cDNA,通常情况下是1ul或者1ul的10倍稀释液,要根据目的基因的表达丰度进行调整。当然这些都是经验值,在操作过程中,还需要根据所用
Real-time qPCR 手册——手把手教你从菜鸟到高手
或者 Premixture 里。如果反应曲线良好或已经优化好反应体系,也可以不加 ROXTM 染料校正。 通常来讲,real-time qPCR 的反应程序不需要像常规的 PCR 那样,要变性、退火、延伸 3 步。由于其产物长度在 80-150 bp 之间,所以只需要变性和退火就可以了。SYBR @Green 等染料法,最好在 PCR 扩增程序结束后,加一个溶解程序,来形成溶解曲线,判断PCR产物的特异性扩增。而溶解程序,仪器都有默认设置,或稍有不同,但都是一个在产物进行溶解时候,进行荧光信号的收集
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