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文献和实验在 37℃,5% 低氧的培养箱中培养 3 天。 10、用 HEs(II)培养基进行换液,放置在 37℃,5% 低氧的培养箱中培养 4 天,之后转移至常氧条件下培养 8 天,达到肝成熟。 类器官培养 11、肝成熟后的 9-12 天,在单层肝细胞上会出现三维结构,此时将漂浮的囊泡状细胞收集起来,加入 Matrigel 并放置在 37℃ 条件下 10min 使 Matrigel 凝固。 12、添加 HM 培养基并完全没过 Matrigel 顶部,每 3 天更换培养基,每 7 天机械传代一次类器官。
培养基进行培养,每隔一天换液一次,直到第 25 天。 7、从第 25 天到第 43 天,用 20 ng/ml BDNF 和 20 ng/ml NT3 替换神经分化培养基中的 FGF2 和 EGF,每隔 2-3 天换液一次。 8、从第 43 天开始,每隔 4 天用 17-18ml 不含生长因子的神经分化培养基换液。在正确操作下,所生成的 hCS 球体可在培养中维持培养数月。 图 1. 体外培养背侧(hCS)前脑类器官的时间线【1】 人脑类器官的应用 在过去的几年中,脑类器官系统已被广泛用于研究
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