免滤纸WB专用转膜海绵垫

操作篇：western blot 之 转膜

多大问题，可能按照上述操作结果会更好。 2. 在加有转移液的搪瓷盘里放入转膜用的夹子、两块海绵垫、一支玻棒、滤纸和浸过的膜。 3. 将夹子打开使黑的一面保持水平。在上面垫一张海绵垫，用玻棒来回擀几遍以擀走里面的气泡。在垫子上垫三层滤纸，一手固定滤纸一手用玻棒擀去其中的气泡。 要领： （1）「用玻棒来回擀几遍以擀走里面的气泡」，要领：一手擀另一手要压住垫子使其不能随便移动。 （2）「在上面垫一张海绵垫」要领：可三张纸先叠在一起在垫于垫子上。个人感觉就垫 1 张滤纸也没

WB 实验背景很脏是什么原因？该如何解决？

用蒸馏水而不是自来水测试，测试结束后要将玻璃板之间的水倒干净，用滤纸吸干残留的水;   灌胶之前要将配好的试剂充分混匀，灌胶的过程中要掌握好速度，缓慢加入，避免产生气泡；   灌注好分离胶后，缓缓加入无水乙醇封胶，该步操作时速度一定要慢，防止胶面被冲变形;在等待分离胶凝固的过程中，不要总去摇晃观察；   温度较高的情况下，30min 左右就会凝固，冬天气温较低可能需要较长时间；   若分离胶液面不平，会影响后期蛋白电泳的效果。   4、转膜   转膜前需在转膜板两侧各放置3-4张滤纸(两侧数量相同

western-blot实验方法

。2、实验步骤： （1）蛋白样品制备：用细胞裂解液抽提蛋白，并测蛋白浓度。 （2）取1 mg 蛋白进行SDS-PAGE。 （3）转膜：（转膜缓冲液4 ℃ 预冷备用，冷却装置于- 80 ℃ 冰箱冷冻备用）。 （4）将2 张海绵垫、2 张滤纸、转膜夹子及玻棒浸泡在盛转膜缓冲液的铝盒中。 （5）戴上手套，剪一张与凝胶尺寸相近的PVDF 膜（83 mm × 75 mm），左上角剪一缺口作为标记，浸泡在盛有20 mL 甲醇的平皿中约15 sec，直到膜变半透明。用纯水冲洗膜2 次。浸泡在盛转膜