YA5240 垂直电泳制胶框 WB&免疫耗材 索莱宝

SDS-PAGE蛋白质电泳常见问题分析

现在泳道顶端(有时在浓缩胶中)的一些大分子未知条带或加样孔底部有沉淀，主要由于还原剂在加热的过程中被氧化而失去活性，致使原来被解离的蛋白质分子重新折叠结合和亚基重新缔合，聚合成大分子，其分子量要比目标条带大，有时不能进入分离胶。但它却于目标条带有相同的免疫学活性，在WB反应中可见其能与目标条带对应的抗体作用。 处理办法：在加热煮沸后，再添加适量的DTT或Beta巯基乙醇，以补充不足的还原剂;或可加适量EDTA来阻止还原剂的氧化。 Q：为什么溴酚蓝不能起到指示作用?

【专题讨论】新手做WB的几张片子，请各位高人指点。

我是一个门外汉，刚刚做WB。做出来后全是模糊的片子，还有就是只有黑点，没有条带。一直没找到原因。恳请各位高人教导。并且按照以下的方法做。我做的是SD大鼠骨骼肌组织的蛋白检测，取300mg肌肉，最终加2.4ML裂解液。10000转离心10分钟。定蛋白也是按一下方法。上样按每10微升80微克蛋白上的样。用的是大连竞迈公司的垂直电泳仪。装模是半干法，按没分钟1KD转的。一抗1：1000.二抗1：6000。。 我测的蛋白在95KD左右，一半装2-2.5小时。但是结果不是背景强就是没东西。而且经常

实验技巧：SDS－PAGE 电泳常见问题及指南

为分子量，X 为迁移率，k、b 均为常数，若将已知分子量的标准蛋白质的迁移率对分子量对数作图，可获得一条标准曲线，未知蛋白质在相同条件下进行电泳，根据它的电泳迁移率即可在标准曲线上求得分子量。Q：配胶缓冲液系统对电泳的影响？A：在 SDS－PAGE 不连续电泳中，制胶缓冲液使用的是 Tris－HCL 缓冲系统，浓缩胶是 pH6.7，分离胶 pH8.9；而电泳缓冲液使用的 Tris－甘氨酸缓冲系统。在浓缩胶中，其 pH 环境呈弱酸性，因此甘氨酸解离很少，其在电场的作用下，泳动效率低；而 CL 离子