柱式海洋动物DNAOUT

中文名称：柱式海洋动物DNAOUT
英文名称：Column Marine Animal DNAOUT
产品及特点
本试剂盒适用于海洋动物的基因组DNA 的提取。试剂盒采用了独特的细胞裂解体系降解蛋白，结合硅胶膜特异吸附核酸的原理，可快速纯化得到高质量的基因组DNA。使用本试剂盒得到的基因组DNA 无蛋白、核酸酶污染，可直接进行PCR、酶切和杂交等相关分子生物学实验。它具有下列特点：
1.简便快速，可快速获得高纯度的基因组DNA；
2.重复性好，产量高；
3.完全去除污染物和抑制剂，便于下游应用。
规格及成分：

成 份	大纸盒包装
Buffer GTL	12 mL
Buffer GL	25 mL
Buffer EB	10 mL
Buffer W1（concentrate）	13 mL第一次使用前按说明加指定量乙醇
Buffer W2（concentrate）	15 mL第一次使用前按说明加指定量乙醇
Proteinase K	1 mL
Spin Column with Collection Tubes	1 mL
使用手册	1份

运输及保存：蛋白酶K 于-20℃，其他组分室温（15 ~ 25℃），可保存12 个月。
自备试剂：无水乙醇，RNase A（可选）。
使用方法：
提示：Buffer W1 和Buffer W2 为浓缩液，按要求加入无水乙醇，用后及时盖紧，以防乙醇挥发。
1.称取20 mg 海洋动物组织（脾组织用量应少10 mg），先打碎处理为细胞悬液，然后10,000rpm(~11,200×g)离心1 min，倒尽上清，加200 μl Buffer GTL，振荡至彻底悬浮。如果没有匀浆仪，也可将组织切成细小碎块，加200 μl Buffer GTL。（注意：如果需要去除RNA，可加入4 μl RNase A（100 mg/ml）溶液（客户自备），振荡15 sec，室温放置5 min。）
2.加入20 μl Proteinase K 溶液，充分混匀，在56℃水浴或金属浴直至组织完全溶解。（注意：不同组织裂解时间不同，通常需1 - 3 h 即可完成（鼠尾需要消化过夜，不会影响后续操作。）每小时颠倒混合样品2 - 3 次，用水浴或金属浴振荡器也可）
3.加入200 μl Buffer GL，充分混匀，70℃水浴或金属浴处理10 min，期间每隔一段时间震荡离心管，溶液变得清亮后短暂离心，以去除管盖内壁的水珠。（注意：Buffer GL 加入时可能会产生白色沉淀，一般70℃时会消失，不影响后续实验，如溶液未变清亮，说明细胞裂解不彻底，可能导致提取的DNA 量少或者提取的DNA 不纯）
4.加入200 μl 无水乙醇，充分震荡，此时可能会出现絮状沉淀，短暂离心以去除管盖内壁水珠。
5.将所得溶液和絮状沉淀转移到离心吸附柱中，12,000 rpm 离心30 sec，弃收集管中的滤液。
6.向吸附柱内加入500 μl Buffer W1，室温12,000 rpm 离心30 sec，弃收集管中滤液。（注意：Buffer W1 为浓缩液，按要求加入无水乙醇，用后应立即盖紧瓶盖，以防酒精挥发）
7.向吸附柱内加入600 μl Buffer W2，室温12,000 rpm 离心30 sec，弃收集管中滤液。（注意：Buffer W2 为浓缩液，按要求加入无水乙醇，用后应立即盖紧瓶盖，以防酒精挥发）
8.向吸附柱内加入500 μl Buffer W2，室温12,000 rpm 离心30 sec，弃收集管中滤液。
9.干燥。将离心吸附柱于12,000 rpm 离心2 min，甩干残留漂洗液。（注意：此步不能省略，否则残留乙醇会影响质粒的后续使用）
10.将离心吸附柱置于一个新的1.5 ml 塑料离心管（自备）中，加入50 ~ 100 μl BufferEB，室温放置2 min。12,000 rpm 离心1 min，离心管底溶液即基因组DNA。
（注意：为增加洗脱效率，可将洗脱液在60℃预热。如需使用去离子水洗脱，可用NaOH 调整其pH 值在7.0 - 8.5 之间，为了增加基因组DNA 回收率，可将得到的溶液重新加入到离心管中，室温放置2 min，再次离心收集）。
注意事项
1.如Buffer GTL 和Buffer GL 产生沉淀，可在56℃水浴溶解；
2.样品应避免反复冻融，否则会导致提取的DNA 片段小，提取量下降；
3.所有离心步骤均为台式离心机，室温下操作。