0.5ml透明螺旋管/保存管/冻存管带盖

western-blot实验方法

。2、实验步骤： （1）蛋白样品制备：用细胞裂解液抽提蛋白，并测蛋白浓度。 （2）取1 mg 蛋白进行SDS-PAGE。 （3）转膜：（转膜缓冲液4 ℃ 预冷备用，冷却装置于- 80 ℃ 冰箱冷冻备用）。 （4）将2 张海绵垫、2 张滤纸、转膜夹子及玻棒浸泡在盛转膜缓冲液的铝盒中。 （5）戴上手套，剪一张与凝胶尺寸相近的PVDF 膜（83 mm × 75 mm），左上角剪一缺口作为标记，浸泡在盛有20 mL 甲醇的平皿中约15 sec，直到膜变半透明。用纯水冲洗膜2 次。浸泡在盛转膜

Western 实验步骤

液裂解细胞，用移液器适当吹打使细胞脱落，大瓶贴壁细胞可以先用胰酶洗脱下来后再裂解，裂解方法仿照悬浮细胞处理。 B、 悬浮细胞的处理：先将悬浮细胞置于 EP 管中 3000 rpm 离心 5 min 去掉上清培养基，每 20 μL 体系细胞加 100 μL 裂解液反复吹打至细胞完全破碎。 处理好的样品 12000 rpm 离心 5 min，取上清即为提取的蛋白。置于 4 ℃ 可保存一周，-20℃ 可保存约 2 个月，-80 ℃ 可保存半年。 蛋白浓度的测定：酶标板，酶标仪、离心机、1 mg/mL

如何做好 Southern 杂交？

，然后将 NC 膜夹在两层滤纸间，保存于干燥处。五、探针标记进行 Southern 杂交的探针一般用放射性物质标记或用地高辛标记。放射性标记灵敏度高，效果好；地高辛标记没有半衰期，安全性好。这里介绍放射性标记。探针的标记方法有随机引物法、切口平移法和末端标记法，有一些试剂盒可供选择，操作也很简单。以下为 Promega 公司随机引物试剂盒提供的标记步骤：1. 取 25~50 ng 模板 DNA 于 0.5 mL 离心管中，100 ℃ 变性 5 min，立即置冰浴。2. 在另一个 0.5 mL 离心管中