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流式周期
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流式周期原理
流式周期原理主要应用于细胞周期分析其基本步骤和应用原理如下:
其中,PI法是一种经典的细胞周期检测方法。PI(插入性核酸荧光染料)能够选择性地嵌入核酸DNA和RNA双链螺旋的碱基之间,与之结合的量与DNA的含量成正比关系。通过流式细胞仪分析,可以得到细胞周期各个阶段的DNA分布状态,从而计算出各个期的百分含量。例如,G0/G1期细胞的荧光强度为1,G2/M期细胞含有双份基因组DNA,其荧光强度的理论值为2。正在进行DNA复制的S期细胞的荧光强度介于1-2之间。步骤 流式细胞仪检测细胞周期的步骤通常包括以下几个主要环节:
这些步骤的目的是检测和分析细胞在细胞周期中的分布,特别是细胞DNA的含量,从而了解细胞增殖和分化的状态。 流式利用不同荧光物质标记的单克隆抗体,与待测成分作用,然后上流式细胞仪检测待测细胞。待测细胞随流动室内的流动鞘液排列成单列,一个个迅速通过激光聚焦区,激光在对每个细胞进行照射时可同时得到前向角散射和侧向角散射2种散射光以及激发荧光标记物发出的信号,利用这些信号,可计算出相对含量,从而得到细胞群的相对比值。
细胞周期分为间期与分裂期两个阶段。间期又分为三期:即DNA合成前期(G1期)、DNA合成期(S期)与DNA合成后期(G2期)。某些细胞在分裂结束后暂时离开细胞周期,停止细胞分裂,执行一定生物学功能(G0期)。由于细胞周期各时相的DNA含量不同,通常正常细胞的G1/G0期具有二倍体细胞的DNA含量(2N),而G2/ M期具有四倍体细胞的DNA含量(4N),而S期的DNA含量介于二倍体和四倍体之间。PI可以与DNA结合,其荧光强度直接反映了细胞内DNA含量。因此,通过流式细胞仪PI染色法对细胞内DNA含量进行检测时,可以将细胞周期各时相区分为G1/G0期,S期和G2/M期。
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