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伊莱博生物科技(上海)有限公司
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细胞实验技术服务
原位杂交是指将特定标记的已知顺序核酸为探针与细胞或组织切片中核酸进行杂交,从而对特定核酸顺序进行精确定量定位的过程。原位杂交可以在细胞标本或组织标本上进行。
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文献和实验原位杂交(ISH)是一种可在细胞涂片、组织切片以及分裂中期染色体带中检测DNA或RNA的技术,此方法原理是由DNA或RNA的序列与互补的标记单链DNA/RNA探针结合形成标记的双链杂交分子,本技术可对组织细胞原位的待测核酸分子进行定性,定量及定位分析。在细胞分化调节、基因定位、肿瘤遗传学、分子病理学、病毒学等领域得到广泛应用。经典的原位杂交技术包括载玻片处理,组织细胞的固定,探针的制备或选购,原位杂交,洗涤以及检测,其中探针制备技术不属于本章专业
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(1)组织准备:大鼠以10%水合氯醛(0.3ml/100g 体重),或1%戊巴比妥钠约1ml(3~4mg/100g体重)腹腔内注射麻醉,用100ml生理盐水冲洗和150ml 4%多聚甲醛主动脉灌注固定。固定半小时后〕鲎橹椋萌?%多聚甲醛液中后固定4~6h,4℃。 如要取脑组织,可于灌注后置4℃冰箱内过夜,次晨取脑组织,后固定4℃4h左右。 (2)组织切片/培养细胞
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