- ￥410
- Solarbio
- 北京
- BC5285
- 2025年07月16日
企业认证
相关产品推荐更多 >
万千商家帮你免费找货
0 人在求购买到急需产品
- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20°C
- 保质期：
6个月
- 英文名：
D-lactate Dehydrogenase（D-LDH）Activity Assay Kit
- 库存：
999
- 供应商：
北京索莱宝科技有限公司
- CAS号：
BC5285-100T/48S
- 规格：
100T/48S
D-乳酸脱氢酶（D-LDH）活性检测试剂盒说明书
微量法
货号：BC5285
规格：100T/48S
产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。
| 试剂名称 |
规格 |
保存条件 |
| 提取液 |
液体60 mL×1瓶 |
2-8℃保存 |
| 试剂一 |
液体7 mL×1瓶 |
2-8℃保存 |
| 试剂二 |
粉剂×1支 |
-20℃保存 |
| 试剂三 |
液体7 mL×1瓶 |
2-8℃保存 |
| 试剂四 |
液体20 mL×1瓶 |
2-8℃保存 |
| 标准品 |
液体1 mL×1支 |
2-8℃保存 |
溶液的配制：
1、 试剂二：临用前加入0.8 mL蒸馏水，充分溶解。用不完的试剂分装保存，-20℃可保存4周，避免反复冻融；
2、 标准品：20 μmol/mL 酸钠溶液。
产品说明：
乳酸脱氢酶（Lactate dehydrogenase，LDH）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，是糖酵解途径的末端酶，催化丙 酮酸与乳,苯 肼,酸之间的可逆反应，伴随着NAD+/NADH之间互变。根据其催化底物-乳酸构型的不同，可分为D-乳酸脱氢酶（D-LDH，EC 1.1.1.28）与L-乳酸脱氢酶（L-LDH，EC 1.1.1.27）。
D-LDH催化NAD+氧化D-乳酸生成酸，酸进一步与2,4-二硝 基苯 肼作用生成酸二硝基 苯腙，在碱性溶液中显棕红色，颜色深浅与酸浓度成正比。
注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计/酶标仪、水浴锅/恒温培养箱、台式离心机、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研钵/匀浆器/细胞超声破碎仪、冰和蒸馏水。
操作步骤：
一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）
1. 细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细菌或细胞加入1mL提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
2. 组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
3. 血清（浆）等其他液体：直接检测。若有沉淀请离心后取上清待测。
二、测定步骤
1、 可见分光光度计/酶标仪预热30min以上，调节波长至450nm，分光光度计蒸馏水调零。
2、 标准溶液的稀释：将20μmol/mL酸钠标准溶液用蒸馏水进行稀释得到2、1、0.5、0.25、0.125、0.0625、0.03125、0.015625、0.0078125μmol/mL标准溶液备用。
3、 标准溶液稀释可参考下表：
| 序号 |
稀释前浓度（μmol/mL） |
标准溶液体积（µL） |
蒸馏水体积（µL） |
稀释后浓度（μmol/mL） |
| 1 |
20 |
100 |
900 |
2 |
| 2 |
2 |
100 |
100 |
1 |
| 3 |
1 |
100 |
100 |
0.5 |
| 4 |
0.5 |
100 |
100 |
0.25 |
| 5 |
0.25 |
100 |
100 |
0.125 |
| 6 |
0.125 |
100 |
100 |
0.0625 |
| 7 |
0.0625 |
100 |
100 |
0.03125 |
| 8 |
0.03125 |
100 |
100 |
0.015625 |
| 9 |
0.015625 |
100 |
100 |
0.0078125 |
备注：实验中每个标准管需10µL标准溶液。
4、 在1.5mLEP管/96孔板按下表步骤加样
| 试剂名称(μL) |
测定管 |
对照管 |
标准管 |
空白管 |
| 待测样本 |
10 |
10 |
- |
- |
| 标准液 |
- |
- |
10 |
- |
| 试剂一 |
50 |
50 |
50 |
50 |
| 试剂二 |
10 |
- |
- |
- |
| 蒸馏水 |
- |
10 |
10 |
20 |
| 充分混匀，37℃水浴15min |
||||
| 试剂三 |
50 |
50 |
50 |
50 |
| 充分混匀，37℃水浴15min |
||||
| 试剂四 |
150 |
150 |
150 |
150 |
充分混匀，室温静置3min，取200μL转移至微量玻璃比色皿或96孔板中，450nm下测定吸光度，计算ΔA测定=A测定-A对照，ΔA标准=A标准-A空白。空白管和标准曲线只需做1-2次，每个测定管需要设一个对照管。
三、D-LDH活性计算
1. 标准曲线的绘制
根据标准管的浓度（x，μmol/mL）和吸光度ΔA标准（y，ΔA标准），建立标准曲线。根据标准曲线，将ΔA测定（y，ΔA测定）带入公式计算样本浓度（x，μmol/mL）。
2. D-LDH活性计算
(1) 按样本蛋白浓度计算
单位的定义：每mg组织蛋白每分钟催化产生1nmol酸定义为一个酶活力单位。
D-LDH活性（U/mg prot）= x×V样÷（Cpr×V样）÷T×103×F=66.67×x÷Cpr×F
(2) 按样本质量计算
单位的定义：每g组织每分钟催化产生1nmol酸定义为一个酶活力单位。
D-LDH活性（U/g 质量）= x×V样÷（W÷V样总×V样）÷T×103×F=66.67×x÷W×F
(3) 按细菌/细胞数量计算
单位的定义：每1万个细菌或细胞每分钟催化产生1nmol酸定义为一个酶活力单位。
(4) D-LDH活性（U/104 cell）= x×V样÷（N÷V样总×V样）÷T×103×F=66.67×x×F÷N
(5) 按血清（浆）等液体体积计算
单位的定义：每mL血清（浆）等液体每分钟催化产生1nmol酸定义为一个酶活力单位。
D-LDH活性（U/mL）=x×V样÷V样÷T×103×F=66.67×x×F
V样：反应体系中加入的样本体积，0.01mL；V样总：加入的提取液体积，1mL；T：反应时间，15min；Cpr：蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；N：细胞或细菌数量，以万计；103：单位换算系数，1μmol/mL=103nmol/mL；F：样本稀释倍数。
注意事项：
1. 如果测定管吸光值接近空白或ΔA测定过低，可适当加大样本量后重新测定；如果测定管吸光值超过1.5或ΔA测定超过0.4，建议将样本用提取液适当稀释后进行测定。注意同步修改计算公式。
实验实例：
1、 取0.109g兔肾加入1mL提取液进行冰浴匀浆，按照测定步骤操作，用96孔板测得计算ΔA测定=A测定-A对照=0.425-0.298=0.127，带入标准曲线y=0.5379x+0.0087，计算x=0.220，按样本质量计算酶活得：
D-LDH活性（U/g 质量）=66.67×x÷W×F =134.520 U/g 质量
2、 取0.1018g拟南芥加入1mL提取液进行冰浴匀浆，按照测定步骤操作，用96孔板测得计算ΔA测定=A测定-A对照=0.236-0.196=0.04，带入标准曲线y=0.5379x+0.0087，计算x=0.058，按样本质量计算酶活得：
D-LDH活性（U/g 质量）=66.67×x÷W×F =38.109 U/g 质量
3、 取500万细胞加入1mL提取液进行冰浴匀浆，按照测定步骤操作，用96孔板测得计算ΔA测定=A测定-A对照=0.225-0.174=0.051，带入标准曲线y=0.5379x+0.0087，计算x=0.079，按细菌/细胞数目计算酶活得：
D-LDH活性（U/104 cell）=0.133×x×F =0.010 U/104 cell
4、 取10μL胎牛血清，按照测定步骤操作，用96孔板测得计算ΔA测定=A测定-A对照=0.322-0.201=0.121，带入标准曲线y=0.5379x+0.0087，计算x=0.209，按液体体积计算酶活得：
D-LDH活性（U/mL）=66.67×x×F =13.919 U/mL
参考文献：
[1] Huang P H, Fu L C, Huang C S, et al. The uptake of oligogalacturonide and its effect on growth inhibition, lactate dehydrogenase activity and galactin-3 release of human cancer cells[J]. Food chemistry, 2012, 132(4): 1987-1995.
[2] Huang Y N, Xu G T, You C P. The research progress of the lactate dehydrogenases in lactic acid bacteria[J]. Science and Technology of Food Industry, 2016, (08): 369-373.
相关系列产品：
BC0540/BC0545 酸激酶（PK）活性检测试剂盒
BC0680/BC0685 乳酸脱氢酶（LDH）活性检测试剂盒
BC0740/BC0745 己糖激酶（HK）活性检测试剂盒
BC2250/BC2255 3-磷酸甘油酸激酶（PGK）活性检测试剂盒
BC2270/BC2275 果糖-1,6-二磷酸醛缩酶（FBA）活性检测试剂盒
风险提示：丁香通仅作为第三方平台，为商家信息发布提供平台空间。用户咨询产品时请注意保护个人信息及财产安全，合理判断，谨慎选购商品，商家和用户对交易行为负责。对于医疗器械类产品，请先查证核实企业经营资质和医疗器械产品注册证情况。
文献和实验|
AuthorSun Pingping, Wang Zhan, Li Sixiao, Yin Jiajing, Gan Yuyang, Liu Shizhao, Lin Zhen, Wang Hailin, Fan Zhexiang, Qu Qian, Hu Zhiqi, Li Kaitao, Miao Yong
|
Publish_toCell and Bioscience
|
|
IF7.5000
|
PMID38183147
|
D 型氨基酸的能力进行了评估，在菌种和菌株水平观察到显著差异，为研究这类神经活性物质对宿主生理功能的调控提供了方法和基础。 Jonathan V. Sweedler 教授和司同研究员为本文共同通讯作者，Cindy J. Lee，Tian A. Qiu 和洪志来为共同第一作者，Huimin Zhao 教授和戴磊研究员作为共同作者对本文亦做出重要贡献。 我们的左右手互为镜像，彼此不能重合。自然界中，与其镜像具有不能互相重合构型或构象的分子被称为手性分子，这一组分子被称为对映异构体。有意
人肺表面活性物质相关蛋白D(SP-D)ELISA试剂盒 说明书
上海西唐生物科技有限公司 021-55229872, 65333639 www.westang.com 人肺表面活性物质相关蛋白D (SP-D)ELISA 试剂盒 ( 用于血清、血浆、细胞培养上清液和其它生物体液内 ) 原理 本实验采用双抗体夹心 ABC-ELISA 法。用抗人 SP-D 单抗包被于酶标板上，标准品和样品中的 SP-D与单抗结合，加入生物素化的抗人
。 图 5 EST12-RACK1 通过 NLRP3 和 GSDMD 引起巨噬细胞焦亡和 IL-1 分泌 A-C：LDH、ELISA 分析 EST12 处理的 WT、NLRP3-/-和 GSDMD-/-腹腔巨噬细胞毒性分析及 IL-1β分泌；D：WB 检测 EST12 处理的 WT、NLRP3-/-腹腔巨噬 GSDMD 和 caspase-1 的活性；E：WB 检测 EST12 和 EST12-Y80A 处理的腹腔巨噬细胞 GSDMD 的活性；F-H：LDH、ELISA、WB 检测 EST12
