LentiCRISPR v2-VIR-sgRNA1-Blas

AAV 在眼科中的应用

2 作为递送载体。派真生物能为您提供从研究至 GMP 级别的多种 AAV 血清型载体，助力眼科疾病基因治疗。     AAV 眼科基因治疗策略 1、基因替代（Gene Replacement）： 原理：将功能正常的目的基因的 CDS 序列由 AAV 转导到细胞内，并在载体上启动子的作用下转录表达 应用场景：隐性单基因疾病 应用案例精选 适应症：双等位基因 RPE65 突变相关视网膜营养不良  病毒载体：AAV2-hRPE65v2  注射方式：视网膜下注射，1.5×10^11 vg/ 眼，0.3 ml

CRISPR-Cas9 基因敲除 sgRNA 设计好之后

的表达质粒。A）PCR 扩增的方法U6：来源于人 U6 小核启动子，常用小 RNA 表达，转录本为 shRNA。将 sgRNA 放到 U6 后面，利用 U6 的启动来扩增 sgRNA。将这部分内容整合到 Cas9 expression plasmid pSpCas9（Cas9 表达质粒）中，一起共转。B）sgRNA 表达质粒的方法现在我要用这个方法来举例设计 p53 引物找到包括 sgRNA 序列的前后 1000 个碱基的序列（2000 bp）找到的序列如下：将上面复制的序列粘贴到 blast 中

CRISPR-Cas9 全程实操教程：从 gRNA 设计到挑单克隆全程指导

gRNA 的设计，常用方法汇总解析》确定靶基因的序列，可通过在线网站设计 (http://tools.genome-engineering.org )，或根据靶基因的 CDS 序列自行设计，最方便的是在 human KO Library sgRNA 里选择。无论选择哪种方式，都建议进行一下 blast。附上在线设计网页截图。输入基因的 name，填写 email address，设计结果稍后会发送到此邮箱，选择序列的类型以及物种。如 sequence type 选择 unique region，一次