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文献和实验的方法是对B细胞的转录子或遗传物质进行测序。该方法适用于杂交瘤,噬菌体展示,酵母菌展示或单细胞筛选,是抗体测序法中最具成本效益和最可靠的方法。但是,源细胞并不一定总是可用的。如果杂交瘤丢失,就可能无法获得遗传物质。在这种情况下,可以使用抗体测序来复原抗体序列,例如使用Edman降解或质谱分析技术。 基于Edman降解法的测序 Edman降解法,也称为埃德曼测序法,是一种成熟的蛋白质序列测定技术,该技术从N端开始,一次读取一个氨基酸。Edman降解法测序的主要优势是样品量要求低(通常需要少于
, 018等)和非标记两种定量法。 其中SPIDER是PEAKS中基于序列标签的搜索工具,可处理从头测序误差和同源突变之间可能出现的重叠部分。它可通过自动且有效地结合从头序列标签和同源物,重建正确的肽序列。 SPIDER 重建正确的肽序列过程(来源:百泰派克) PEAKS软件中使用的一系列算法已经过修改配置到PEAKS AB软件中,成为用于自动单克隆抗体测序公认的首选方法。
的表面大概只有 10 个氨基酸与人 VH 的不同,在 FR2 中存在有四个特异的氨基酸:普通抗体 FR2 中 V37、G44、L45 和 W47 这 4 个氨基酸残基是在进化中相当保守的疏水性残基,而 VHH 中,这四个突变为亲水性的氨基酸残基 F37、E44、 R45、G47,增加了 VHH 的水溶性。利用这一特性,可将人源抗体 VH 的序列进行优化,对 FR2 中的一些氨基酸进行 VHH 特征性改造,从而使 VH 抗体的稳定性和溶解性更好,并且保持原有的特异性和亲和力。 纳米抗体的应用纳米抗体
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