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文献和实验人免疫球蛋白G Fc段受体Ⅱ(FcγRⅡ/CD32)酶联免疫分析
人 免疫球蛋白G Fc 段受体Ⅱ(Fc γR Ⅱ/CD32) 酶联免疫分析 试剂盒使用说明书 本试剂仅供研究使用 目的:本试剂盒用于测定人血清,血浆及相关液体样本中免疫球蛋白G Fc 段受体Ⅱ(Fc γR Ⅱ/CD32) 的含量。 实验原理: 本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中 人 免疫球蛋白G Fc 段受体Ⅱ(Fc γR Ⅱ/CD32) 水平。用纯化的 人 免疫球蛋白G Fc 段受体Ⅱ(Fc γR Ⅱ/CD32
一、样本准备 详见流式细胞术样本制备技术、流式实验样本制备方法及注意事项 收集细胞,200 目筛网过滤,收集滤液,300 g 离心 5 min,弃上清 向细胞中加入适量细胞染色 buffer(或含 1%BSA 的 PBS),用移液枪轻轻吹打细胞重悬 二、细胞计数 用血球计数板或其他仪器对悬液进行计数后,调整细胞浓度约为 1 × 107/mL 三、设置实验分组 四、封闭 Fc 受体 封闭 Fc 受体能减少染色过程中的非特异性染色。 小鼠中,纯化的 CD16/CD32 单抗能和 FcγR
能和 FcγR Ⅲ/Ⅱ结合,封闭非特异性染色,使阴性细胞的背景荧光降至未标记细胞的水平。加入 0.5-1μg 纯的抗小鼠 CD16/32 单克隆抗体,室温孵育 10min。 对于人和大鼠,可直接使用过量的与荧光抗体相同来源和亚型的纯化 Ig 或者与目标种属相同来源血清进行阻断,或者用商业化的 Fc 受体阻断剂。 五、细胞表面抗体孵育 根据实验设计,除空白对照外,对应的单染管、全染管加入相应的抗体 5μL,混匀,4℃ 避光孵育 30min。 六、固定破膜 按照说明书稀释固定破膜液。 每管加入
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