2min DNA/RNA直提试剂盒

公司产品仅供科研研究使用、不得用于临床诊断！

货号	产品名称	规格
XG-P3118	2min DNA/RNA直提试剂盒	100T

描述：

本试剂适合从各种组织、体液中快速提取制备 PCR检测级别的基因组 DNA 和 RNA。制备的 DNA 和 RNA 可直接应用于 TaqMan PCR、One-Step PCR、LAMP、RPA 的扩增实验。该试剂制备 DNA/RNA 样品操作及其简单，通常2min 内可完成制备。

储存: 室温保存 6 个月，若长期保存请置于-20℃（5 年）。
适用组织类型
从感染病毒的组织样本中提取病毒 DNA/RNA。
从感染细菌的组织样本中提取细菌 DNA。
从动物口腔唾液拭孖中提取病毒 DNA/RNA。
从植物组织中提取 DNA/RNA。
从血浆、血清中提取病毒 DNA/RNA

操作方法
1. 动物、植物组织中提取病毒 DNA/RNA将组织样本约 1~10 mg 放入到 1.5mL EP 管中，并加入500 μl 溶液 DNA/RNA DirOut-A，加入几粒钢珠，置于组织研磨仪中研磨 1min 左右。研磨完毕后加入 100 μl 的DNA/RNA DirOut-B 溶液，漩涡混合均匀（可短离心将未磨碎的组织去除），取 0.5 μl 的该溶液作为 DNA/RNA 模板，直接用于下游 PCR 等试验即可。注意：组织使用量不要超过 50mg，过多的组织量会抑制后续 PCR 反应。
2. 从血清、血浆、唾液等体液中提取病毒 DNA/RNA在 1.5mL EP 管中加入 100 μl 血清、血浆、唾液等液体样本，并加入 500 μl 溶液 DNA/RNA DirOut-A，漩涡混合30s。漩涡完毕后加入 100 μl 的 DNA/RNA DirOut-B 溶液，漩涡混合均匀，取 0.5 μl 的该溶液作为 DNA/RNA 模板，直接用于下游 PCR 等试验即可。
3. 从动物咀嚼过的沙包或拭孖中提取病毒 DNA/RNA剪切部分动物咀嚼过的沙包或拭孖放置到 1.5 ml EP 管中，并加入 500 μl 溶液 DNA/RNA DirOut-A，漩涡混合30s。漩涡完毕后加入 100 μl 的 DNA/RNA DirOut-B 溶液漩涡混合均匀，取 1 μl 的该溶液作为 DNA/RNA 模板，直接用于下游 PCR 等试验即可。

PCR反应基本步骤：
一般的聚合酶链式反应由20到35个循环组成，每个循环包括以下3个步骤：
变性(Denaturation)：
利用高温（93-98℃）使双链DNA分离。高温将连接两条DNA链的氢键打断。在第一个循环之前，通常加热长一些时间以确保模板和引物完全分离，仅以单链形式存在。该步骤时间1-2分钟，接下来PCR仪就控制温度进入循环阶段。
退火或称接合,复性(Annealling)：
在DNA双链分离后，降低温度使得引物可以结合于单链DNA上。此阶段的温度通常低于引物熔点5℃。错误的退火温度可能导致引物不与模板结合或者错误地结合。该步骤时间1-2分钟。
延伸(Extension)：
DNA聚合酶由降温时结合上的引物开始沿着DNA链合成互补链。此阶段的温度依赖于DNA聚合酶。该步骤时间依赖于聚合酶以及需要合成的DNA片段长度。传统的Taq估计合成1000bp/min、较新的Tbr（来自于嗜热菌Thermus brockianus）约40秒、商业公司生产的融合型聚合酶仅需约10-15秒。
 

PCR 反应需要使用哪些试剂？
一、模板DNA：PCR反应需要模板DNA，如从细胞、组织、血液中提取DNA等；
二、引物：PCR反应的两个引物，分别与模板DNA的两端配对扩增所需的特定区域，引物也可以合成为TA克隆等过程中使用到的引物；
三、dNTPs：PCR反应中需要四种dNTPs，包括脱氧腺苷酸（dATP）、脱氧胸苷酸（dCTP）、脱氧鸟苷酸（dGTP）、脱氧胞嘧啶酸（dTTP），用于细胞分裂、DNA合成等生物学过程，用于PCR扩增的模板DNA链的延伸和扩增；四、Taq DNA聚合酶：PCR反应需要的聚合酶，一般使用Taq聚合酶，还有一些其他种类的聚合酶如PFU、Phusion等，用于扩增DNA链；
五、PCR buffer溶液：对PCR反应具有缓冲作用，调节反应pH，硫代硫酸氢盐SDS、小分子有机化合物如甲醛，可增强PCR反应特异性，从而提高反应效率；
六、酶切体系：PCR扩增往往涉及到重组、构建和测序等等实验步骤，常常需要进行酶切操作。
七、MARK:一种分子量标准，用来判别DNA片段大小的工具。
八、DNA纯化试剂盒：用于纯化PCR反应产物；


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