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- 西格
- XG-P2829
- 国产
- 2025年07月11日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
40
- 保质期：
12 个月
- 供应商：
上海西格
- 保存条件：
2-8°C
- 规格：
1600U
| 货号 | 产品名称 | 规格 |
| XG-P2829 | Bst 3.0 DNA/RNA polymerase | 1600U |
产品简介：
Bst 3.0 DNA/RNA聚合酶是嗜热脂肪芽孢杆菌（Bacillus stearothermophilus）DNA聚合酶I大片段（Bst LF）经过基因突变改造过的聚合酶。该酶具有5’-3’的DNA聚合酶活性和链置换活性，无5’-3’核酸外切酶活性。与Bst 2.0 DNA聚合酶相比，Bst 3.0 DNA聚合酶的热稳定性、扩增速度、链置换速度和逆转录活性有了进一步的提升。适合高温快速LAMP类型的等温扩增实验。
活性单位： 一个活力单位（1 U）即在 65°C 条件下，30 分钟内催化 25 nmol dNTP 的掺入反应成为酸不溶性物质所需的酶量。
质量控制：SDS-PAGE 检测纯度大于99%，经检测无核酸外切酶，内切酶活性，无细菌基因组DNA残留。通过各种模板进行等温扩增测试。室温存放一周，无明显活性改变。
应用范围：
1.DNA或RNA为模板的LAMP等温扩增。
2.适用于链置换方法扩增DNA。
3.高GC结构DNA的测序和微量DNA模板快速测序。
10×Bst Buffer：200 mM Tris-HCl，100 mM (NH4)2SO4，500 mM KCl，80mM MgSO4，1% Tween? 20
pH 8.8@ 25°C
储存缓冲液：10 mM Tris-HCl，50 mM KCl，1 mM DTT，0.1 mM EDTA，50% Glycerol，0.1% Triton? X-100，pH 7.5 @ 25°C
PCR反应基本步骤：
一般的聚合酶链式反应由20到35个循环组成，每个循环包括以下3个步骤：
变性(Denaturation)：
利用高温（93-98℃）使双链DNA分离。高温将连接两条DNA链的氢键打断。在第一个循环之前，通常加热长一些时间以确保模板和引物完全分离，仅以单链形式存在。该步骤时间1-2分钟，接下来PCR仪就控制温度进入循环阶段。
退火或称接合,复性(Annealling)：
在DNA双链分离后，降低温度使得引物可以结合于单链DNA上。此阶段的温度通常低于引物熔点5℃。错误的退火温度可能导致引物不与模板结合或者错误地结合。该步骤时间1-2分钟。
延伸(Extension)：
DNA聚合酶由降温时结合上的引物开始沿着DNA链合成互补链。此阶段的温度依赖于DNA聚合酶。该步骤时间依赖于聚合酶以及需要合成的DNA片段长度。传统的Taq估计合成1000bp/min、较新的Tbr（来自于嗜热菌Thermus brockianus）约40秒、商业公司生产的融合型聚合酶仅需约10-15秒。
PCR 反应需要使用哪些试剂？
一、模板DNA：PCR反应需要模板DNA，如从细胞、组织、血液中提取DNA等；
二、引物：PCR反应的两个引物，分别与模板DNA的两端配对扩增所需的特定区域，引物也可以合成为TA克隆等过程中使用到的引物；
三、dNTPs：PCR反应中需要四种dNTPs，包括脱氧腺苷酸（dATP）、脱氧胸苷酸（dCTP）、脱氧鸟苷酸（dGTP）、脱氧胞嘧啶酸（dTTP），用于细胞分裂、DNA合成等生物学过程，用于PCR扩增的模板DNA链的延伸和扩增；四、Taq DNA聚合酶：PCR反应需要的聚合酶，一般使用Taq聚合酶，还有一些其他种类的聚合酶如PFU、Phusion等，用于扩增DNA链；
五、PCR buffer溶液：对PCR反应具有缓冲作用，调节反应pH，硫代硫酸氢盐SDS、小分子有机化合物如甲醛，可增强PCR反应特异性，从而提高反应效率；
六、酶切体系：PCR扩增往往涉及到重组、构建和测序等等实验步骤，常常需要进行酶切操作。
七、MARK:一种分子量标准，用来判别DNA片段大小的工具。
八、DNA纯化试剂盒：用于纯化PCR反应产物；
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