- ￥3744
- 西格
- XG-P3097
- 国产
- 2025年07月14日
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- 详细信息
- 技术资料
- 库存：
20
- 保质期：
3 年
- 供应商：
上海西格
- 保存条件：
-20°C
- 规格：
100 ug
PCR反应条件优化：
1、变性温度和时间：
Tth PrimPol primase保证模板DNA解链完全是保证整个PCR扩增成功的关键。加热90~95°C, 30~60s，再复杂的DNA 分子也可变性为单链。温度过高或高温持续时间过长，可对Taq酶活性和dNTP分子造成损害。
2、复性温度和时间:
PCR扩增特异性取决于复性过程中引物与模板的结合。复性温度越高，产物特异性越高。复性温度越低，产物特异性越低。需根据引物的Tm值具体设定。
3、延伸温度和时间:
一般位于Taq酶最适作用温度70~75°C之间。引物小于16个核苷酸时，过高的延伸温度不利于引物与模板的结合，可以缓慢升温到70~75°C。延伸反应时间，可根据待扩增片段的长度而定，小于1kb, 1min足够；大于1kb需加长延伸时间。Taq酶可根据1kb/min增加时间。这里需要注意，延伸时间过长可能出现非特异扩增。因此需要设置恰到好处的延伸时间。
4、循环数:
其他参数选定后，PCR循环次数主要取决于模板DNA的浓度。理论上说20〜25次循环后，PCR产物的积累即可达到最大值，实际操作中由于每步反应的产率不可能达到100%，因此不管模板浓度是多少，20~30次是比较合理的循环次数。循环次数越多，非特异扩增增加。
降落PCR与温度梯度PCR都是对反应体系中的退火温度进行优化，但两者在原理上有所不同。
温度梯度PCR是为了找到最适的退火温度，设置不同的退火温度进行多管PCR，将其分别放置在PCR仪中的不同温度模块进行反应，最终找到最适的退火温度，并进一步以此退火温度进行普通PCR扩增。
降落PCR是为了提高反应的特异性，通过设计一系列不断降低的退火温度，在同一PCR管内进行PCR扩增，最终获得大量的特异性扩增产物。
与温度梯度PCR相比，降落PCR更有优势。温度梯度PCR需要多次反应或多管反应找到最适的退火温度，之后还需以找到的最适退火温度再次进行PCR，才能得到较好的扩增效果，操作比较繁琐。降落PCR只需一次反应就可以获得很好的扩增效果，避免了对每对引物进行最适退火温度的优化和测定工作。
降落PCR适用于不确定引物的最适Tm值，或引物扩增效果不佳时，不了解目的模板同源性程度，使用降落PCR可以快速、特异的得到目的扩增片段。根据不同实验的需要，降落PCR还可与其它PCR方法同时使用，如实时定量降落PCR、竞争降落PCR等。
PCR的特点：
特异性强：使用两对引物进行扩增提高了特异性，第一轮PCR中由外引物错配产生非特异性产物，同时在第二轮PCR中内引物与错误片段配对扩增的概率极低，降低了扩增多个靶位点的可能性。
灵敏度高：进行两轮PCR扩增，可以执行更多的循环，从低拷贝样本中扩增得到足量的产物，克服了单次扩增平台期限制，提高PCR的灵敏度。
公司正在出售的产品：
1、变性温度和时间：
Tth PrimPol primase保证模板DNA解链完全是保证整个PCR扩增成功的关键。加热90~95°C, 30~60s，再复杂的DNA 分子也可变性为单链。温度过高或高温持续时间过长，可对Taq酶活性和dNTP分子造成损害。
2、复性温度和时间:
PCR扩增特异性取决于复性过程中引物与模板的结合。复性温度越高，产物特异性越高。复性温度越低，产物特异性越低。需根据引物的Tm值具体设定。
3、延伸温度和时间:
一般位于Taq酶最适作用温度70~75°C之间。引物小于16个核苷酸时，过高的延伸温度不利于引物与模板的结合，可以缓慢升温到70~75°C。延伸反应时间，可根据待扩增片段的长度而定，小于1kb, 1min足够；大于1kb需加长延伸时间。Taq酶可根据1kb/min增加时间。这里需要注意，延伸时间过长可能出现非特异扩增。因此需要设置恰到好处的延伸时间。
4、循环数:
其他参数选定后，PCR循环次数主要取决于模板DNA的浓度。理论上说20〜25次循环后，PCR产物的积累即可达到最大值，实际操作中由于每步反应的产率不可能达到100%，因此不管模板浓度是多少，20~30次是比较合理的循环次数。循环次数越多，非特异扩增增加。
| 货号 | 产品名称 | 规格 |
| XG-P3097 | Tth PrimPol primase | 100 ug |
描述：
PrimPol 是一种 DNA 介导的 RNA/DNA 引发酶/聚合酶，即它既具有引发酶的活性有具有 DNA 聚合酶的活性，因此可启动体外 RNA/DNA 合成、DNA 延伸和跨主治复制的 DNA 修饰引导先导链的不连续合成。TthPrimPol 蛋白来源于嗜热杆菌 T. thermophilus，该蛋白具有依赖于 DNA 合成 DNA Primer 的活性（Primase），识别序列为 3’-GTCC-5’，在镁离子存在条件下，其可利用ATP 或 dATP 作为辅酶合成 7-9nt 的 DNA Primer。该蛋白为通过基因重组技术获得的可溶纯性产物。
储存：-20℃可保存 3 年。
Storage Buffer：
20mM Tris-HCl，pH7.5
200mM NaCl
5mM DTT
25%甘油
降落PCR与温度梯度PCR都是对反应体系中的退火温度进行优化，但两者在原理上有所不同。
温度梯度PCR是为了找到最适的退火温度，设置不同的退火温度进行多管PCR，将其分别放置在PCR仪中的不同温度模块进行反应，最终找到最适的退火温度，并进一步以此退火温度进行普通PCR扩增。
降落PCR是为了提高反应的特异性，通过设计一系列不断降低的退火温度，在同一PCR管内进行PCR扩增，最终获得大量的特异性扩增产物。
与温度梯度PCR相比，降落PCR更有优势。温度梯度PCR需要多次反应或多管反应找到最适的退火温度，之后还需以找到的最适退火温度再次进行PCR，才能得到较好的扩增效果，操作比较繁琐。降落PCR只需一次反应就可以获得很好的扩增效果，避免了对每对引物进行最适退火温度的优化和测定工作。
降落PCR适用于不确定引物的最适Tm值，或引物扩增效果不佳时，不了解目的模板同源性程度，使用降落PCR可以快速、特异的得到目的扩增片段。根据不同实验的需要，降落PCR还可与其它PCR方法同时使用，如实时定量降落PCR、竞争降落PCR等。
PCR的特点：
特异性强：使用两对引物进行扩增提高了特异性，第一轮PCR中由外引物错配产生非特异性产物，同时在第二轮PCR中内引物与错误片段配对扩增的概率极低，降低了扩增多个靶位点的可能性。
灵敏度高：进行两轮PCR扩增，可以执行更多的循环，从低拷贝样本中扩增得到足量的产物，克服了单次扩增平台期限制，提高PCR的灵敏度。
公司正在出售的产品：
| 啮蚀艾肯菌染料法荧光定量PCR试剂盒 | 水通道蛋白4抗体ELISA试剂盒 AQP-4 Ab免费代测试剂 |
| 埃博拉病毒探针法荧光定量RT-PCR试剂盒 | GATA结合蛋白3ELISA试剂盒 GATA3免费代测试剂 |
| 传染性胰脏坏死病病毒PCR检测试剂盒 | 抗类免疫缺陷病毒抗体ELISA试剂盒 |
| 流行性造血器官坏死病毒PCR检测试剂盒 | G蛋白偶合受体44ELISA试剂盒 |
| 单纯疱疹病毒2型染料法荧光定量PCR试剂盒 | K-乙酰转移酶2BELISA试剂盒 |
| 新德里超级细菌染料法荧光定量PCR试剂盒 | Meichroacidin蛋白ELISA试剂盒 |
| 野牛奥斯特线虫PCR检测试剂盒 | NELISA试剂盒 |
| 大米BT63基因PCR检测试剂盒 | Notch2氨基端样蛋白ELISA试剂盒 |
| 丹毒丝菌属通用探针法荧光定量PCR试剂盒 | N-乙酰谷氨酸合酶ELISA试剂盒 |
| 恙虫病东方体探针法荧光定量PCR试剂盒 | P钙黏蛋白/胎盘钙黏蛋白ELISA试剂盒 |
| 传染性法氏囊病病毒PCR检测试剂盒（荧光PCR法） | 人血吸虫抗体(IgG)ELISA试剂盒 |
| 鸭瘟病毒PCR检测试剂盒说明书 | 人NOGO-A抗体(Nogo-AAb)ELISA检测试剂盒 |
| 禽传染性支气管炎病毒通用探针法荧光定量RT-PCR试剂盒 | Tth PrimPol primase人胃蛋白酶原II 试剂盒ELISA |
| 弯曲杆菌PCR检测试剂盒 | 大鼠免疫球蛋白G(IgG)ELISA Kit |
| 嵴病毒PCR检测试剂盒 | 鸡17羟皮质类固醇(17-OHCS)检测试剂盒elisa |
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Tth PrimPol primase
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