- ￥3744
- 西格
- XG-P3087
- 国产
- 2025年07月11日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
45
- 保质期：
2 年
- 供应商：
上海西格
- 保存条件：
-20°C
- 规格：
50 ug
描述：
T4 噬菌体复制分为依赖于起始子的起始复制和依赖于重组酶的复制。由起始复制产生的 3’-ssDNA 作为重组复制的第一步链侵入的组份，该 3’-ssDNA 被 T4 gp32蛋白所覆盖，同时将 T4 UvsY 募集到此；T4 UvsY 作为T4 UvsX 的 loader 将其运载至此，于此同时 gp32 被置换下来， UvsX 和 UvsY 形成突触结构， 然后侵入同源的双链形成 D-Loop， 一旦形成 D-Loop， UvsX 即被置换下来。D-loop 被置换链作为滞后链合成的模板，很快被gp32 结合。随后， 解旋酶 loader gp59 与 gp32 覆盖的DNA 复制叉结合，将 gp41/61 运载至此， gp61 蛋白合成寡核苷酸片段促进滞后链 DNA 的合成，而 gp41 通过解旋模板而促进先导链的 DNA 合成。最后，聚合酶的滑板蛋白 gp45 和其 loder 蛋白 gp44/62 与先导链相结合，促进聚合酶 gp43 的组装，gp45 将 gp43 运载至复制叉处后启动先导链和滞后链的合成，gp44/62 随后从复制叉处解离。因此， gp45 作为聚合酶 gp43 的 loader 在 gp43引导的 DNA 合成中起到重要作用。
储存：-20℃。
Storage Buffer：
20mM Tris-HCl，pH7.5
200mM NaCl
5mM DTT
25% Glycerol
| 货号 | 产品名称 | 规格 |
| XG-P3087 | T4 GP45 Clamp Protein | 50 ug |
PCR反应条件优化：
1、变性温度和时间：
T4 GP45 Clamp Protein保证模板DNA解链完全是保证整个PCR扩增成功的关键。加热90~95°C, 30~60s，再复杂的DNA 分子也可变性为单链。温度过高或高温持续时间过长，可对Taq酶活性和dNTP分子造成损害。
2、复性温度和时间:
PCR扩增特异性取决于复性过程中引物与模板的结合。复性温度越高，产物特异性越高。复性温度越低，产物特异性越低。需根据引物的Tm值具体设定。
3、延伸温度和时间:
一般位于Taq酶最适作用温度70~75°C之间。引物小于16个核苷酸时，过高的延伸温度不利于引物与模板的结合，可以缓慢升温到70~75°C。延伸反应时间，可根据待扩增片段的长度而定，小于1kb, 1min足够；大于1kb需加长延伸时间。Taq酶可根据1kb/min增加时间。这里需要注意，延伸时间过长可能出现非特异扩增。因此需要设置恰到好处的延伸时间。
4、循环数:
其他参数选定后，PCR循环次数主要取决于模板DNA的浓度。理论上说20〜25次循环后，PCR产物的积累即可达到最大值，实际操作中由于每步反应的产率不可能达到100%，因此不管模板浓度是多少，20~30次是比较合理的循环次数。循环次数越多，非特异扩增增加。
PCR的特点：
特异性强：使用两对引物进行扩增提高了特异性，第一轮PCR中由外引物错配产生非特异性产物，同时在第二轮PCR中内引物与错误片段配对扩增的概率极低，降低了扩增多个靶位点的可能性。
灵敏度高：进行两轮PCR扩增，可以执行更多的循环，从低拷贝样本中扩增得到足量的产物，克服了单次扩增平台期限制，提高PCR的灵敏度。
降落PCR与温度梯度PCR的区别：
降落PCR与温度梯度PCR都是对反应体系中的退火温度进行优化，但两者在原理上有所不同。
温度梯度PCR是为了找到最适的退火温度，设置不同的退火温度进行多管PCR，将其分别放置在PCR仪中的不同温度模块进行反应，最终找到最适的退火温度，并进一步以此退火温度进行普通PCR扩增。
降落PCR是为了提高反应的特异性，通过设计一系列不断降低的退火温度，在同一PCR管内进行PCR扩增，最终获得大量的特异性扩增产物。
与温度梯度PCR相比，降落PCR更有优势。温度梯度PCR需要多次反应或多管反应找到最适的退火温度，之后还需以找到的最适退火温度再次进行PCR，才能得到较好的扩增效果，操作比较繁琐。降落PCR只需一次反应就可以获得很好的扩增效果，避免了对每对引物进行最适退火温度的优化和测定工作。
降落PCR适用于不确定引物的最适Tm值，或引物扩增效果不佳时，不了解目的模板同源性程度，使用降落PCR可以快速、特异的得到目的扩增片段。根据不同实验的需要，降落PCR还可与其它PCR方法同时使用，如实时定量降落PCR、竞争降落PCR等。
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