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- 详细信息
- 技术资料
- 库存:
31
- 保质期:
12 个月
- 供应商:
上海西格
- 保存条件:
2-8°C
- 规格:
40KU
公司产品仅供科研研究使用、不得用于临床诊断!
PCR反应基本步骤:
一般的聚合酶链式反应由20到35个循环组成,每个循环包括以下3个步骤:
变性(Denaturation):
利用高温(93-98℃)使双链DNA分离。高温将连接两条DNA链的氢键打断。在第一个循环之前,通常加热长一些时间以确保模板和引物完全分离,仅以单链形式存在。该步骤时间1-2分钟,接下来PCR仪就控制温度进入循环阶段。
退火或称接合,复性(Annealling):
在DNA双链分离后,降低温度使得引物可以结合于单链DNA上。此阶段的温度通常低于引物熔点5℃。错误的退火温度可能导致引物不与模板结合或者错误地结合。该步骤时间1-2分钟。
延伸(Extension):
DNA聚合酶由降温时结合上的引物开始沿着DNA链合成互补链。此阶段的温度依赖于DNA聚合酶。该步骤时间依赖于聚合酶以及需要合成的DNA片段长度。传统的Taq估计合成1000bp/min、较新的Tbr(来自于嗜热菌Thermus brockianus)约40秒、商业公司生产的融合型聚合酶仅需约10-15秒。
PCR 反应需要使用哪些试剂?
一、模板DNA:PCR反应需要模板DNA,如从细胞、组织、血液中提取DNA等;
二、引物:PCR反应的两个引物,分别与模板DNA的两端配对扩增所需的特定区域,引物也可以合成为TA克隆等过程中使用到的引物;
三、dNTPs:PCR反应中需要四种dNTPs,包括脱氧腺苷酸(dATP)、脱氧胸苷酸(dCTP)、脱氧鸟苷酸(dGTP)、脱氧胞嘧啶酸(dTTP),用于细胞分裂、DNA合成等生物学过程,用于PCR扩增的模板DNA链的延伸和扩增;四、Taq DNA聚合酶:PCR反应需要的聚合酶,一般使用Taq聚合酶,还有一些其他种类的聚合酶如PFU、Phusion等,用于扩增DNA链;
五、PCR buffer溶液:对PCR反应具有缓冲作用,调节反应pH,硫代硫酸氢盐SDS、小分子有机化合物如甲醛,可增强PCR反应特异性,从而提高反应效率;
六、酶切体系:PCR扩增往往涉及到重组、构建和测序等等实验步骤,常常需要进行酶切操作。
七、MARK:一种分子量标准,用来判别DNA片段大小的工具。
八、DNA纯化试剂盒:用于纯化PCR反应产物;
公司供应的相关产品:
| 货号 | 产品名称 | 规格 |
| XG-P2999 | Murine Rnase inhibitor(80U/ul), 无甘油 | 40KU |
PCR反应基本步骤:
一般的聚合酶链式反应由20到35个循环组成,每个循环包括以下3个步骤:
变性(Denaturation):
利用高温(93-98℃)使双链DNA分离。高温将连接两条DNA链的氢键打断。在第一个循环之前,通常加热长一些时间以确保模板和引物完全分离,仅以单链形式存在。该步骤时间1-2分钟,接下来PCR仪就控制温度进入循环阶段。
退火或称接合,复性(Annealling):
在DNA双链分离后,降低温度使得引物可以结合于单链DNA上。此阶段的温度通常低于引物熔点5℃。错误的退火温度可能导致引物不与模板结合或者错误地结合。该步骤时间1-2分钟。
延伸(Extension):
DNA聚合酶由降温时结合上的引物开始沿着DNA链合成互补链。此阶段的温度依赖于DNA聚合酶。该步骤时间依赖于聚合酶以及需要合成的DNA片段长度。传统的Taq估计合成1000bp/min、较新的Tbr(来自于嗜热菌Thermus brockianus)约40秒、商业公司生产的融合型聚合酶仅需约10-15秒。
PCR 反应需要使用哪些试剂?
一、模板DNA:PCR反应需要模板DNA,如从细胞、组织、血液中提取DNA等;
二、引物:PCR反应的两个引物,分别与模板DNA的两端配对扩增所需的特定区域,引物也可以合成为TA克隆等过程中使用到的引物;
三、dNTPs:PCR反应中需要四种dNTPs,包括脱氧腺苷酸(dATP)、脱氧胸苷酸(dCTP)、脱氧鸟苷酸(dGTP)、脱氧胞嘧啶酸(dTTP),用于细胞分裂、DNA合成等生物学过程,用于PCR扩增的模板DNA链的延伸和扩增;四、Taq DNA聚合酶:PCR反应需要的聚合酶,一般使用Taq聚合酶,还有一些其他种类的聚合酶如PFU、Phusion等,用于扩增DNA链;
五、PCR buffer溶液:对PCR反应具有缓冲作用,调节反应pH,硫代硫酸氢盐SDS、小分子有机化合物如甲醛,可增强PCR反应特异性,从而提高反应效率;
六、酶切体系:PCR扩增往往涉及到重组、构建和测序等等实验步骤,常常需要进行酶切操作。
七、MARK:一种分子量标准,用来判别DNA片段大小的工具。
八、DNA纯化试剂盒:用于纯化PCR反应产物;
公司供应的相关产品:
| 塔那痘病毒染料法荧光定量PCR试剂盒 | 胃抑素ELISA试剂盒 GIP免费代测试剂 |
| 鸭沙门氏菌探针法荧光定量PCR试剂盒 | Cupidin蛋白ELISA试剂盒 CPD免费代测试剂 |
| 欧洲棕色野兔综合症病毒PCR检测试剂盒 | 抗外切酶体成分10ELISA试剂盒 |
| 棒杆菌通用PCR检测试剂盒 | dCMP脱氨酶ELISA试剂盒 |
| 肠贾第虫染料法荧光定量PCR试剂盒 | FK506结合蛋白5ELISA试剂盒 |
| 野菊花探针法PCR鉴定试剂盒 | GTP环化水解酶1ELISA试剂盒 |
| 玉米BT11 PCR检测试剂盒 | I |
| 肠道病毒PCR检测试剂盒 | Kindlin1蛋白ELISA试剂盒 |
| 肠道致细胞病变人孤儿病毒PCR检测试剂盒 | MAX基因关联蛋白AELISA试剂盒 |
| 幼禽螺杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒 | Ninein蛋白ELISA试剂盒 |
| 侧柏叶染料法PCR鉴定试剂盒 | 人增殖诱导配体(APRIL)试剂盒ELISA |
| 乙型肝炎病毒PCR检测试剂盒价格 | 人高分子量细胞角蛋白(CK-HMW)ELISA试剂盒 |
| 粪产碱杆菌染料法荧光定量PCR试剂盒 | Murine Rnase inhibitor(80U/ul), 无甘油人血小板生成素受体(C-MPL)自身抗体IgG 检测试剂盒elisa |
| 回归热疏螺旋体(回归热包柔螺旋体)探针法荧光定量PCR试剂盒 | 大鼠甲状腺素(T4)试剂盒 ELISA |
| 禽杯状病毒PCR检测试剂盒 | 大鼠血纤蛋白原(Fbg)ELISA试剂盒 |
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Murine Rnase inhibitor(80U/ul), 无甘油
¥7020









