- ￥1170
- 西格
- XG-P2995
- 国产
- 2025年07月15日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
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26
- 保质期：
2 年
- 供应商：
上海西格
- 保存条件：
-20°C 以下
- 规格：
20KU
| 货号 | 产品名称 | 规格 |
| XG-P2995 | ThermoStable V Reverse transcriptase（200U/ul）(无甘油) | 20KU |
PCR 反应需要使用哪些试剂？
一、模板DNA：PCR反应需要模板DNA，如从细胞、组织、血液中提取DNA等；
二、引物：PCR反应的两个引物，分别与模板DNA的两端配对扩增所需的特定区域，引物也可以合成为TA克隆等过程中使用到的引物；
三、dNTPs：PCR反应中需要四种dNTPs，包括脱氧腺苷酸（dATP）、脱氧胸苷酸（dCTP）、脱氧鸟苷酸（dGTP）、脱氧胞嘧啶酸（dTTP），用于细胞分裂、DNA合成等生物学过程，用于PCR扩增的模板DNA链的延伸和扩增；四、Taq DNA聚合酶：PCR反应需要的聚合酶，一般使用Taq聚合酶，还有一些其他种类的聚合酶如PFU、Phusion等，用于扩增DNA链；
五、PCR buffer溶液：对PCR反应具有缓冲作用，调节反应pH，硫代硫酸氢盐SDS、小分子有机化合物如甲醛，可增强PCR反应特异性，从而提高反应效率；
六、酶切体系：PCR扩增往往涉及到重组、构建和测序等等实验步骤，常常需要进行酶切操作。
七、MARK:一种分子量标准，用来判别DNA片段大小的工具。
八、DNA纯化试剂盒：用于纯化PCR反应产物；
PCR反应基本步骤：
一般的聚合酶链式反应由20到35个循环组成，每个循环包括以下3个步骤：
变性(Denaturation)：
利用高温（93-98℃）使双链DNA分离。高温将连接两条DNA链的氢键打断。在第一个循环之前，通常加热长一些时间以确保模板和引物完全分离，仅以单链形式存在。该步骤时间1-2分钟，接下来PCR仪就控制温度进入循环阶段。
退火或称接合,复性(Annealling)：
在DNA双链分离后，降低温度使得引物可以结合于单链DNA上。此阶段的温度通常低于引物熔点5℃。错误的退火温度可能导致引物不与模板结合或者错误地结合。该步骤时间1-2分钟。
延伸(Extension)：
DNA聚合酶由降温时结合上的引物开始沿着DNA链合成互补链。此阶段的温度依赖于DNA聚合酶。该步骤时间依赖于聚合酶以及需要合成的DNA片段长度。传统的Taq估计合成1000bp/min、较新的Tbr（来自于嗜热菌Thermus brockianus）约40秒、商业公司生产的融合型聚合酶仅需约10-15秒。
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Center, Inc. (Cincinnati, OH). Reverse transcriptase (RT) buffer from GIBCOBRL (Gaithersburg, MD), deoxynucleotide triphosphate mixture (dNTPs) from Pharmacia Biotech (Piscataway, NJ), dithiothreitol (DTT, GIBCOBRL
PCR引物设计和优化(PCR PRIMER DESIGN AND REACTION OPTIMISATION)
, gelatin or BSA to 100ug/ml, and/or non-ionic detergents such as Tween-20 or Nonidet P-40 or Triton X-100 （0.05 - 0.10% v/v） （Innis and Gelfand, 1990）。 Modern formulations may differ considerably, however - they are also generally proprietary. PCR
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