Golden MLV Reverse Transcripta

商品属性：

描述：
Golden MLV Reverse Transcriptase 反转录 酶是在鼠源病毒反转录酶基础上进行定点突变改良而得。该 酶去除了 RNase H 活性中，从而避免反转录过程中降解 RNA。同时经过突变文库筛选，使得其热稳定性更强，可耐 受 55℃高温反应（最佳活性温度为 50℃）。相比于低温条件 下反转录反应，采用高温反转录可显著打开 RNA 二级结构， 从而提高复杂 RNA 模板的扩增性能、提高反转录 cDNA 的 长度和产量，从而提高后续检测的灵敏度。 

单位定义：以 poly(rA)为模板、oligo(dT)为引物，在 37°C条件下，10 分钟内催化 1 nmol 的 dTTP 掺入形成酸不溶性沉淀物所需要的酶量，定义为一个活性单位。
酶储存液：20mM Tris-HCl,pH7.5, 150mM NaCl, 0.1%Tween20, 2mM DTT, 50%甘油。
储存：-20°C 可保存 3 年。

操作方法
1. 按以下组分配制反应体系
Golden MLV Reverse Transcriptase 1 μl
10×RT Buffer 2 μl
dNTP Mixture (10 mM each) 1 μl
Total RNA or Poly(A) RNA 0.1-2 μg
20×Oligo dT(25)&Random Primer * 1 μl
RNase Inhibitor (40 U/μl) 0.2 μl
RNase Free H2O Up to 20 μl
*注：Oligo dT(25) 使用浓度为 20~50 μM, 如使用 Random9随机引物可使用 125 μM，基因特异性引物可使用 5 μM。
2．在 PCR 仪上按下列条件进行反转录反应
 30°C 5 min
 *37-50°C 15~30 min
 85°C 5 min
*推荐的反转录温度设置为 50°C，无论是高 GC 或长片段模板，均可获得综合性的 cDNA 产量。
3. 反转录所得的 cDNA 可直接用于 PCR 反应或储存于-20°C。
4. 其它注意事项：该酶可与 Taq DNA 聚合酶组合，用于One-Step RT-PCR，推荐的 RT 温度为 50°C，RT 时间为5min，酶的参考用量为：终反应浓度 0.5-2U/ul。