Golden MLV Reverse Transcripta

公司产品仅供科研研究使用、不得用于临床诊断！

货号	产品名称	规格
XG-P2994	Golden MLV Reverse Transcriptase（200U/ul）	20KU

描 述 ：

Golden MLV Reverse Transcriptase 反转录 酶是在鼠源病毒反转录酶基础上进行定点突变改良而得。该 酶去除了 RNase H 活性中，从而避免反转录过程中降解 RNA。同时经过突变文库筛选，使得其热稳定性更强，可耐 受 55℃高温反应（最佳活性温度为 50℃）。相比于低温条件 下反转录反应，采用高温反转录可显著打开 RNA 二级结构， 从而提高复杂 RNA 模板的扩增性能、提高反转录 cDNA 的 长度和产量，从而提高后续检测的灵敏度。 

单位定义：以 poly(rA)为模板、oligo(dT)为引物，在 37°C条件下，10 分钟内催化 1 nmol 的 dTTP 掺入形成酸不溶性沉淀物所需要的酶量，定义为一个活性单位。
酶储存液：20mM Tris-HCl,pH7.5, 150mM NaCl, 0.1%Tween20, 2mM DTT, 50%甘油。
储存：-20°C 可保存 3 年。

操作方法
1. 按以下组分配制反应体系
Golden MLV Reverse Transcriptase 1 μl
10×RT Buffer 2 μl
dNTP Mixture (10 mM each) 1 μl
Total RNA or Poly(A) RNA 0.1-2 μg
20×Oligo dT(25)&Random Primer * 1 μl
RNase Inhibitor (40 U/μl) 0.2 μl
RNase Free H2O Up to 20 μl
*注：Oligo dT(25) 使用浓度为 20~50 μM, 如使用 Random9随机引物可使用 125 μM，基因特异性引物可使用 5 μM。
2．在 PCR 仪上按下列条件进行反转录反应
 30°C 5 min
 *37-50°C 15~30 min
 85°C 5 min
*推荐的反转录温度设置为 50°C，无论是高 GC 或长片段模板，均可获得综合性的 cDNA 产量。
3. 反转录所得的 cDNA 可直接用于 PCR 反应或储存于-20°C。
4. 其它注意事项：该酶可与 Taq DNA 聚合酶组合，用于One-Step RT-PCR，推荐的 RT 温度为 50°C，RT 时间为5min，酶的参考用量为：终反应浓度 0.5-2U/ul。

 PCR反应基本步骤：
一般的聚合酶链式反应由20到35个循环组成，每个循环包括以下3个步骤：
变性(Denaturation)：
利用高温（93-98℃）使双链DNA分离。高温将连接两条DNA链的氢键打断。在第一个循环之前，通常加热长一些时间以确保模板和引物完全分离，仅以单链形式存在。该步骤时间1-2分钟，接下来PCR仪就控制温度进入循环阶段。
退火或称接合,复性(Annealling)：
在DNA双链分离后，降低温度使得引物可以结合于单链DNA上。此阶段的温度通常低于引物熔点5℃。错误的退火温度可能导致引物不与模板结合或者错误地结合。该步骤时间1-2分钟。
延伸(Extension)：
DNA聚合酶由降温时结合上的引物开始沿着DNA链合成互补链。此阶段的温度依赖于DNA聚合酶。该步骤时间依赖于聚合酶以及需要合成的DNA片段长度。传统的Taq估计合成1000bp/min、较新的Tbr（来自于嗜热菌Thermus brockianus）约40秒、商业公司生产的融合型聚合酶仅需约10-15秒。
 

PCR 反应需要使用哪些试剂？
一、模板DNA：PCR反应需要模板DNA，如从细胞、组织、血液中提取DNA等；
二、引物：PCR反应的两个引物，分别与模板DNA的两端配对扩增所需的特定区域，引物也可以合成为TA克隆等过程中使用到的引物；
三、dNTPs：PCR反应中需要四种dNTPs，包括脱氧腺苷酸（dATP）、脱氧胸苷酸（dCTP）、脱氧鸟苷酸（dGTP）、脱氧胞嘧啶酸（dTTP），用于细胞分裂、DNA合成等生物学过程，用于PCR扩增的模板DNA链的延伸和扩增；四、Taq DNA聚合酶：PCR反应需要的聚合酶，一般使用Taq聚合酶，还有一些其他种类的聚合酶如PFU、Phusion等，用于扩增DNA链；
五、PCR buffer溶液：对PCR反应具有缓冲作用，调节反应pH，硫代硫酸氢盐SDS、小分子有机化合物如甲醛，可增强PCR反应特异性，从而提高反应效率；
六、酶切体系：PCR扩增往往涉及到重组、构建和测序等等实验步骤，常常需要进行酶切操作。
七、MARK:一种分子量标准，用来判别DNA片段大小的工具。
八、DNA纯化试剂盒：用于纯化PCR反应产物；


 
公司供应的相关产品：

禽痘病毒染料法荧光定量PCR试剂盒	无花果酶2ELISA试剂盒 FCN2免费代测试剂
蒙得维的沙门氏菌探针法荧光定量PCR试剂盒	Cullin4A蛋白ELISA试剂盒 CUL4A免费代测试剂
丹毒丝菌属通用PCR检测试剂盒	抗小脑ELISA试剂盒
牛棒杆菌PCR检测试剂盒	C-型凝集素域家族3成员BELISA试剂盒
肠道腺病毒41型染料法荧光定量PCR试剂盒	Fc受体样蛋白3ELISA试剂盒
伊派病毒染料法荧光定量RT-PCR试剂盒	Goosecoid2蛋白ELISA试剂盒
玉米GA21 PCR检测试剂盒	Hornerin蛋白ELISA试剂盒
肠道病毒EV70 PCR检测试剂盒	Juxtanodin蛋白ELISA试剂盒
肠道病毒通用型/EV/柯萨奇病毒A型联PCR检测试剂盒	Marapsin2蛋白ELISA试剂盒
玉米BT PCR检测试剂盒	NFKB抑制因子ELISA试剂盒
草鱼出血热病毒(GCHV)PCR检测试剂盒(荧光-PCR法)	人真核细胞延伸因子2(eEF2)检测试剂盒elisa
乙型肝炎病毒型PCR检测试剂盒供应	人金属硫蛋白(MT)试剂盒ELISA
荚膜阿耶罗菌探针法荧光定量PCR试剂盒	Golden MLV Reverse Transcriptase（200U/ul）人牙本质基质蛋白1(DMP1)ELISA试剂盒
伯氏疏螺旋体（伯氏包柔螺旋体）探针法荧光定量PCR试剂盒	大鼠甲状旁腺激素(PTH)  ELISA试剂盒
弗莱克索病毒PCR检测试剂盒	大鼠血清淀粉样蛋白A(SAA)ELISA试剂盒