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M-MLV III One-S
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50
12 个月
上海西格
2-8°C
50ul体系×40 次
产品简介:M-MLV III One Step RT-PCR Kit专为以RNA为模板的终点法PCR检测而设计。使用基因特异引物 (GSP),逆转录和PCR反应在一管内完成,不需要额外的开管/移液操作,大大提高了检测通量,并降低了污染的风险。经过优化的缓冲体系,M-MLV III One Step RT-PCR Kit的检测灵敏度可达到1 pg总RNA,并可扩增长达12kb的片段。试剂盒以便捷的Master Mix形式提供。2 × One Step Mix包含优化的缓冲体系和dNTP;Enzyme Mix包含比例优化的Reverse Transcriptase III、RNase inhibitor以及Hot start DNA Polymerase。产品特点:1.反转录反应温度范围广,从37℃到55℃均可进行,因此既可用于常规反转录,也可用于高GC含量和具有复杂二级结构的RNA模板的反转录;2.反应所需试剂只有两种,操作简单,同时降低了污染几率;3.PCR产物3'端加有一个A碱基,可克隆入T载体。 注意事项:1.防止RNase污染,请保持实验区洁净;2.操作时需要戴干净的手套、口罩;3.实验所用的离心管、枪头等耗材均需保证RNase free。
PCR反应基本步骤:一般的聚合酶链式反应由20到35个循环组成,每个循环包括以下3个步骤:变性(Denaturation):利用高温(93-98℃)使双链DNA分离。高温将连接两条DNA链的氢键打断。在第一个循环之前,通常加热长一些时间以确保模板和引物完全分离,仅以单链形式存在。该步骤时间1-2分钟,接下来PCR仪就控制温度进入循环阶段。退火或称接合,复性(Annealling):在DNA双链分离后,降低温度使得引物可以结合于单链DNA上。此阶段的温度通常低于引物熔点5℃。错误的退火温度可能导致引物不与模板结合或者错误地结合。该步骤时间1-2分钟。延伸(Extension):DNA聚合酶由降温时结合上的引物开始沿着DNA链合成互补链。此阶段的温度依赖于DNA聚合酶。该步骤时间依赖于聚合酶以及需要合成的DNA片段长度。传统的Taq估计合成1000bp/min、较新的Tbr(来自于嗜热菌Thermus brockianus)约40秒、商业公司生产的融合型聚合酶仅需约10-15秒。PCR 反应需要使用哪些试剂?一、模板DNA:PCR反应需要模板DNA,如从细胞、组织、血液中提取DNA等;二、引物:PCR反应的两个引物,分别与模板DNA的两端配对扩增所需的特定区域,引物也可以合成为TA克隆等过程中使用到的引物;三、dNTPs:PCR反应中需要四种dNTPs,包括脱氧腺苷酸(dATP)、脱氧胸苷酸(dCTP)、脱氧鸟苷酸(dGTP)、脱氧胞嘧啶酸(dTTP),用于细胞分裂、DNA合成等生物学过程,用于PCR扩增的模板DNA链的延伸和扩增;四、Taq DNA聚合酶:PCR反应需要的聚合酶,一般使用Taq聚合酶,还有一些其他种类的聚合酶如PFU、Phusion等,用于扩增DNA链;五、PCR buffer溶液:对PCR反应具有缓冲作用,调节反应pH,硫代硫酸氢盐SDS、小分子有机化合物如甲醛,可增强PCR反应特异性,从而提高反应效率;六、酶切体系:PCR扩增往往涉及到重组、构建和测序等等实验步骤,常常需要进行酶切操作。七、MARK:一种分子量标准,用来判别DNA片段大小的工具。八、DNA纯化试剂盒:用于纯化PCR反应产物; 公司供应的相关产品:
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