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- 信帆生物
- XJC5164
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- 2025年07月13日
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信帆生物
（分光光度法测总谷胱甘肽、还原型谷胱甘肽、氧化型谷胱甘肽）
一、测定原理：
利用DTNB的循环反应，测定组织和体液中的总谷胱甘肽和氧化
型谷胱甘肽的相对含量。
- 试剂盒组成和配制（50 管/24 样）
三、样本测试前处理（除蛋白）
1、全血样本：
①、取血，用肝素或者 EDTA 抗凝。
②、取 100μL 抗凝的全血，加入 400μL 的新配的试剂四（样
本稀释倍数为 5 倍，如果样本量少，可按 1：4 的比例相
应缩小），漩涡混匀 30 秒后，4℃静置 5 分钟。
③、3500 转/分钟，离心 10 分钟。
④、取上清 4℃备用；如果需要过夜请于-20℃保存。
2、红细胞样本：
①、取血，用肝素或者 EDTA 抗凝。
②、立即 2000 转/分钟，离心 10 分钟，小心吸去上层的血浆层
和红细胞层表面乳白色的白细胞层。
③、取 100μL 红细胞，加入 400μL 新配的试剂四（样本稀释
倍数为 5 倍，如果样本量少可按 1：4 的比例相应缩小），
漩涡混匀 30 秒后，4℃静置 5 分钟。
④、3500 转/分钟，离心 10 分钟。
⑤、取上清备用（4℃存放）；如果需要过夜请于-20℃保存。
3、血清（浆）样本：
①、取血，用肝素或者 EDTA 抗凝。
②、立即 2000 转/分钟，离心 10 分钟，小心吸取上层淡黄色
的血浆层。
③、取 100μL 血浆，立即加入 400μL 新配的试剂四（样本已
稀释 5 倍）（如果样本量少，可按 1：4 的比例相应缩小），
漩涡混匀 30 秒后，4℃静置 5 分钟。
④、3500 转/分钟，离心 10 分钟。
⑤、取上清 4℃备用；如果需要过夜请于-20℃保存。
4、组织匀浆：
①、取新鲜组织，在生理盐水中漂洗，吸去组织表面多余的
水分。
②、准确称取组织重量，按照重量体积比为 1:4 进行组织匀浆，
即 0.2g 组织加 0.8mL 新配的试剂四进行匀浆，（如果样
本量少，可按 1：4 的比例相应缩小），操作在冰浴中进
行，匀浆组织为 20%。
③、制备的组织匀浆，3500 转/分钟，离心 10 分钟。
④、取上清备用（放置 4℃）；如果需要过夜请于-20℃保存。
七、实验注意点：
1、样本中 GSH 代谢很快，故收集样本后必须尽快用试
剂四处理，以减少样本中 GSH 的消失。经试剂四处
理后的上清，其中 GSH 含量可以在-20℃条件下保存
6 个月。
2、反应时间 10 分钟必须准确计时。
3、样本在测定前可以取 1～2 个样本先做预试，如果吸
光度太高，要用试剂四溶液将样本稀释到适当的倍
数，以使得样本中 T-GSH/GSSG 的含量在标准曲线
的线性范围内（组织匀浆一般为 20%浓度，红细胞
一般 2～5 倍稀释，血浆原液操作）
八、测定意义：
谷胱甘肽在机体内的广泛分布和多功能性愈来愈引起
科研工作者的注意。它在许多重要的生物体现象中起着直
接或间接的作用，因而涉及到许多不同的研究课题，如酶
反应机理，蛋白质和 DNA 等大分子的生物合成、中间代
谢、辐射、肿瘤、免疫、环境毒素和老化等。特别是近年
来许多研究课题都涉及到细胞对活性氧和自由基的防御
作用。其中测定生物样品中，特别是血清（浆）中还原型
和氧化型谷胱甘肽（GSH 和 GSSG）含量变化，是机体氧
化物牵累的重要指标。
谷胱甘肽测试盒
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文献和实验C10 H17 N3 SO6 。为γ -L-谷氨酰 -L-半胱氨酞甘氨酸（ 1）。谷胱甘肽如（ 2）所示在活体内参与氧化还原反应。所以具有保护如组织蛋白酶、番木瓜酶及琥珀酸脱氢酶那样具有 SH基酶的 SH基作用。另外是催化甲基乙二醛形成乳酸的乳酰谷胱甘肽裂解酶（ EC． 4． 4． 1． 5）不可缺少的辅助基质。在解毒作用中形成硫醚氨酸，被认为有毒物质先与谷胱甘肽结合使谷氨酸与甘氨酸部分切断。
谷胱甘肽是属于含有巯基的、小分子肽类物质，具有两种重要的抗氧化作用和整合解毒作用。谷胱甘肽是由谷氨酸、半胱氨酸和甘氨酸结合而成的三肽，半胱氨酸上的巯基为其活性基团（故谷胱甘肽常简写为G-SH），易于碘乙酸、芥子气（一种毒气）、铅、汞、砷等重金属盐络合，而具有了整合解毒作用。谷胱甘肽（尤其是肝细胞内的谷胱甘肽）具有非常重要的生理作用就是整合解毒作用，能与某些药物（如扑热息痛）、毒素（如自由基、重金属）等结合，参与生物转化作用，从而把机体内有害的毒物转化为无害的物质，排泄出体外。
一种利用还原型 NAD（ P）将氧化型谷胱甘肽（ GS－ SG）催化反应成还原型（ GSH）的酶 EC． 1． 6． 4． 2。在动植物组织、微生物、酵母中均可以见到。反应是不可逆的。一经透析便会失活，通过添加 Mg2 或 M2 n 使之活化。鼠肝脏的酶几乎只能利用 NADP作为补酶，但是在人的红血球的酶也利用 NAD进行作用。对胱氨酸和高胱氨酸均无作用。可从酵母中制取结晶物。植物组织中似乎可对脱氢酶和氧化酶的连结起作用。将谷胱甘肽还原酶 GS－ SG、 NADP
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